PCR扩增产物鉴定与纯化
实验原理
实验试剂
实验设备
实验材料
实验步骤
1. 使用1×TAE缓冲液制作琼脂糖凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳。（参照琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验）
2. 在紫外灯下切出含有目的DNA（约600bp）的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面的液体。此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高DNA回收率。
注意：切胶时请注意不要将DNA长时间暴露于紫外灯下，以防止DNA损伤。
3. 切碎胶块。胶块切碎后可以加快操作步骤6的胶块融化时间，提高DNA的回收率。
4. 称量胶块重量，计算胶块体积。计算胶块体积时，以1mg=1µL进行计算。
5. 向胶块中加入胶块融化液DR-IBuffer，DR-IBuffer的加量如下表：
| 凝胶浓度 | DR-IBuffer使用量 |
| 1% | 3个凝胶体积量 |
| 1%-1.5% | 4个凝胶体积量 |
| 1.5%-2% | 5个凝胶体积量 |
6. 均匀混合后75℃加热，融化胶块（低熔点琼脂糖凝胶只需在45℃加热）。此时应间断振荡混合，使胶块充分融化（约6～10分钟）。
注意：胶块一定要充分融化，否则将会严重影响DNA的回收率。
7. 向上述胶块融化液中加入DR-IBuffer量的1/2体积量的DR-IIBuffer，均匀混合。当分离小于400bp的DNA片段时，应在此溶液中再加入终浓度为20%的异丙醇。
8. 将试剂盒中的SpinColumn安置于CollectionTube上。
9. 将上述操作7的溶液转移至SpinColumn中，12000rpm离心1min，弃滤液。
注意：如将滤液再加入SpinColumn中离心一次，可以提高DNA的回收率。
10.将500µL的RinseA加入SpinColumn中，12000rpm离心30s，弃滤液。
11.将700µL的RinseB加入SpinColumn中，12000rpm离心30s，弃滤液。
12.重复操作步骤11。
13.将SpinColumn安置于新的1.5mL的离心管上，在SpinColumn膜的中央处加入25µL的灭菌蒸馏水或ElutionBuffer，室温静置1min。
注意：使用加热至60℃的灭菌蒸馏水或ElutionBuffer有利于提高洗脱效率。
14.12000rpm离心1min洗脱DNA。
-20℃低温保存纯化的目的DNA片段。
