大肠杆菌转化实验一一步法
大肠杆菌转化实验（热击法）
大肠杆菌转化可以：
（
1
）
将重组
DNA
分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制，
增殖和表达，
以获得目的基因；（
2
）验证大肠杆菌感受态细胞效果；（
3
）用于分子生物学其他研究。
1
原理：
质粒
DNA
粘附在细菌细胞表面，经过
42°C
短时间的热击处理，促进吸收
DNA.
然后在非
选择培养基中培养一代，
待质粒上所带的抗菌素基因表达，
就可以在含抗菌素的培养基中生
长。
2
器材：
旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，
1.5ml
微量离心管，双面微量离心管架，干
式恒温气浴（或恒温水浴锅），制冰机，恒温摇床，培养皿（已铺好固体
LB-Amp
），超
净工作台，酒精灯，玻璃涂棒，恒温培养箱。
3
材料和试剂：
质粒
DNA
，重组
DNA
，培养基（不加抗菌素），
LB
培养基（加抗菌素），无菌
ddH2O
，
IPTG
，
X-gal
。
4
实验准备：
无菌
ddH2O
，
1.5ml
离心管装入铝制饭盒
（灭菌）
、
移液器吸头装入相应的吸头盒
（灭菌）
，
20%IPTG
（
M/V
），
2%X-gal
（
M/V
，用
N,N-
二甲基甲酰胺配）。
5
操作步骤：
（
1
）事先将恒温水浴的温度调到
42
℃。
（
2
）从
-70
℃
超低温冰柜中取出一管（
100
μ
l
）感受态菌，立即用手指加温融化后插入冰
上，冰浴
5~10min
。
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发布于 ： 2021-07-21
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