报告基因实验一利用MUG检测 β葡萄糖醛酸酶（GUS）
报告基因实验可以用于：（1）植物分子生物学研究；（2）用以鉴别基因的表达模式；（3）在获得稳定转化植株的过程中也可用作转化细胞的标记。
实验方法原理报告基因是一个分子生物学概念，它是指一类在细胞、组织/器官或个体处于特定情况下会表达并使得他们产生易于检测、且实验材料原本不会产生的性状的基因。作为报告基因，在遗传选择和筛选检测方面必须具有以下几个条件：①已被克隆和全序列已测定；②表达产物在受体细胞中本不存在，即无背景，在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物；③其表达产物能进行定量测定。实验材料组织样品
试剂、试剂盒GUS 缓冲液
仪器、耗材离心机
实验步骤一、完整组织的提取
1. 取少量（5~50 mg ) 叶片、根、愈伤等组织样品，所需样品量由材料决定。
2. 离心管中加入 GUS 缓冲液（50~200 ul），组织匀浆。
3. 16000 g，4℃ 离心 15 min，沉淀破碎的细胞。
4. 检测提取物的蛋白质浓度。
5. 用 GUS 缓冲液稀释提取物，使蛋白质总浓度为 0.1 mg/ ml。
6. 立即使用提取物，或者 -80℃ 保存。
二、原生质体制备
1. 通过离心（50 g，1 min），小份（1x106）收集转化的原生质体，用 2 ml 的 3 M 缓冲液重悬。
2. 取一份原生质体，用血细胞计数板计数。
3. 将剩余的原生质体 50 g 离心 1 min，用 150 ul 的 GUS 缓冲液重悬，短暂涡旋（或者通过 26 G 的抽吸），静置 5 min。
4. 离心（16000 g，4℃ 15 min ) ，使细胞碎片沉淀。检测提取物的蛋白质浓度，参照完整组织样品的方法对其进行稀释。
本实验来源「麦类作物转基因技术与田间鉴定实验指南」〔英〕H.D.琼斯 P.R .休里 主编。
免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
发布于 ： 2018-08-03
阅读（11）
▍
相关分类
▍
相关文章
