方案16.9 细胞系的 DNA STR 谱一用SGM Plus®进行扩增
实验材料 | SGMPlus®PCR混合物的各种成分 试剂、试剂盒 | 纯无菌水 仪器、耗材 | 热循环仪 实验步骤 | 1.参照ABI的操作步骤,为待扩增样品准备足量的混合物,每个样品管包含: (a)AMPF/STR®PCR反应混合物21μl (b)AMPF/STR®SGMPlus®引物一套11μl (c)Amplitaqgold®DNA聚合酶1μl 2.从每个样品管吸出30μl混合物,或加到单个大PCR管中,或加到薄壁微滴定板中,用黏性薄片封板。 3.从冰箱取出样品,待融化。 4.混匀样品,甩下管中内容物。 5.加约1ngDNA到已有适量SGMPlus®PCR混合物样品管中,加适当体积的无菌纯水(如Sigma组织培养用水)至终体积20μl。 6.同时扩增一个已知基因,作为对照(如作为试剂盒的对照)。 7.将样品管置热循环仪(如ABI9700)上,已设定了适当的循环细节的程序,如下,开始运行: (a)95°C保持11min±5s。 (b)94±1°C保持1min±2s。 (c)59±1°C保持1min±2s。 (d)72±1°C保持1min±2s。 8.重复步骤7b到7d28次。 9.60±1°C保持45min±5s。 10.4°C保温至需要时。 |
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发布于 : 2018-08-03
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