石蜡切片免疫组化实验一卵白素生物素过氧化物酶复合物(ABC)法
实验材料 | 蜡块切片 试剂、试剂盒 | 多聚甲醛蒸馏水蔗糖过氧化氢甲醇PBS酒精KPBS牛血清白蛋白叠氮纳一抗二抗 仪器、耗材 | 冰箱显微镜烧杯 实验步骤 | 1. 4%多聚甲醛常规灌注固定,取材并置20%蔗糖溶液(4℃)中过夜。蜡块制作。切片,贴片。0.01MKPBS清洗5min×3后; 2. 加入配好的0.3%的过氧化氢甲醇溶液(甲醇80ml+0.01MKPBS100ml+30%过氧化氢)30min,以消除内源性过氧化物酶的影响,0.01M PBS清洗5min×3; 3. 加入配好的0.3%TritonX100(30%TritonX100+0.01M KPBS100ml)30min,以增加细胞的通透性,0.01MKPBS清洗5min×3; 4. 加入用血清稀释液(牛血清白蛋白1.00g+0.01MPBS100ml+叠氮纳0.08g)稀释的一抗,4℃存放24-48h;吸去抗体,0.01MKPBS洗5min×3; 5. 加入0.01MKPBS稀释的的二抗,室温孵育2h。0.01MKPBS洗5min×3; 6. 加入ABC复合物之类的抗体,室温孵育2h,0.01MKPBS洗5min×3;蒸馏水迅速冲三次; 7. 加入显色液,进行免疫组织化学显色,时间一般不超过30min,可不时在显微镜下进行观察,待细胞着色而背底颜色较淡时马上吸去显色液,用蒸馏水迅速冲三次后加入0.01MKPBS终止反应; 8. 梯度酒精脱水之后,封片,拍照。 |
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发布于 : 2021-07-15
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