植物原生质体的制备可以用于:(1)由于其具有再生细胞壁,进行连续的细胞分裂并再生成完整植株的能力;(2)具有摄取外源大分子、细胞器,以及细菌,病毒的能力,因此是进行遗传操作,基因转移的好材料;(3)通过同种和异种植物的原生质体融合,可产生异核体,实现体细胞杂交,培育出新品种。
11 收藏 4173 阅读 详情去掉植物细胞壁的方法可以是机械的人工操作,也可以利用酶解法。较早利用机械法制备原生质体的首推Klercker(1892),直到1960 年英国科学家Cocking 才第一次用酶法大量制备原生质体。本实验以植物的叶肉组织为材料,利用纤维素酶和果胶酶来消化细胞壁,分离细胞。
1、取材 根据实验目的和条件选取不同的材料
2、分离原生质体
(1) 撕叶下表皮
(2)酶解 将撕去下表皮的叶片剪成小块,放在盛有5mL 酶液的小培养皿中,让去除下表皮的一面接触酶液,辅满一层,在25——28℃下酶解60——90 分钟
3、收集纯化
(1)用吸管将酶解液吸至5mL 离心管中,以600rpm 离心5 分钟以上,使原生质体沉降
(2)将上清(酶解液)回收,剩下原生质体及残渣于管底
(3)加氯化钙液约2mL,轻轻吹打均匀
(4)用注射器向离心管底部缓缓注入蔗糖约2—3mL,出现下部蔗糖液,上部原生质体悬浮液
(5)以600rpm 离心10 分钟,在两液相之间出现一条绿色带,便是纯净的原生质体
4、观察或培养
取少许原生质体于载片上,盖片观察其形态,或者将原生质体接种在培养基上进行培养,再生植株。
要培养悬浮细胞系需较长时间。因此,应着重改善培养条件,主要包括选用合适 的培养基 包括培养基 种类 、添加物 、激素种类及水平等 及培养方式 根 据培养物状态适时改换适宜培养基 选择合适的外植体及诱导时期 。
原生质体是裸露的、具有生命活性的细胞,体内包裹着细胞核、细胞器、细胞质等, 因此原生质体具有再生细胞壁、进行连续分裂并生成完整植株的能力 , 即具有细胞全能性。原生质 体能 摄 人 如 DNA、质粒 、病毒 、细菌 、细胞器等外源物质 , 是植物细胞工程进行遗传操作 、基因转移的良好材料 。
来源于《植物原生质体的制备与活力检测研究进展》生物技术通报。
您知悉并同意,丁香通平台展示产品并非为平台自身产品,您发起询价或试用申请后,平台将会把您已提供或按要求提供的相关信息同步提供至所咨询的具体产品商家,由商家为您提供具体产品的价格咨询或产品试用注意事项及相关试用产品或完成相应购买,因此您知悉并授权平台将您的信息进行同步共享。您有权拒绝,但您知悉将无法参加询价或试用活动。