大肠杆菌质粒DNA的提取（碱裂解法）一碱裂解法
大肠杆菌质粒
DNA
的提取（碱裂解法）
来源：
生物谷
2008-8-25
访问量：
8789
评论
(0)
分享
0
大肠杆菌质粒
DNA
的提取（碱裂解法）
此方法适用于小量质粒
DNA
的提取提取的质粒
DNA
可直接用于酶切
PCR
扩增。
1).
取
1.5ml
细菌培养物于
EP
管中，
4000rpm
离心
1
分钟，弃上清液，使细菌沉淀尽量干燥；
2).
将细菌沉淀重悬于用冰预冷的
100µl
溶液
I(50mmol/L
葡萄糖，
10mmol/LEDTApH8.0
，
25mmol/L
Tris-HClpH8.0)
中，剧烈振荡；
3).
加入
200µl
新配制的溶液
II(0.2mol/LNaOH
，
1
％
SDS
（
m/v
）
)
，盖紧
EP
管口，快速颠倒离心管
5
次，以混合混合物，确保离心管的整个内表面与溶液
II
接触，不要涡旋，置于冰浴中；
4).
加入
150µl
预冷溶液
III(
每
100ml
的溶液
III
中含
60ml5mol/L
乙酸钾，
11.5ml
冰乙酸，
28.5ml
H
2
O)
，盖紧
EP
管口，反复颠倒数次，使溶液
III
在粘稠的细菌裂解物中分散均匀，之后将管置于冰上
3~5
分钟；
5).
在最大转速下离心
5min
，取上清液于另一新
EP
管；
6).
用两倍体积的乙醇室温沉淀双链
DNA
，振荡混合于室温放置
2
分钟，最大转速离心
5
分钟；
7).
小心吸去上清液，将离心管倒置于滤纸上，以使所有液体都流出，在将附于管壁的液滴除尽；
8).
加
1ml70
％乙醇洗涤沉淀，振荡混合，用
12,000g
离心
2
分钟，弃上清，将开口的
EP
管置于室温
使乙醇挥发，直至
EP
管中内没有可见的液体存在（
5
～
10
分钟），用适量的
ddH
2
O
溶解；
9).
用
0.5µl
的
RNase37
℃温育
5~10
分钟；
10).
电泳鉴定。
免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
发布于 ： 2018-08-03
阅读（210）
▍
相关分类
▍
相关文章
