细胞凋亡检测实验一线粒体膜势能的检测
线粒体膜势能的检测
线粒体跨膜电位DYmt的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体DYmt崩溃，则细胞凋亡不可逆转。
线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料如Rhodamine 123、3，3-Dihexyloxacarbocyanine iodide[DiOC6（3）]、Tetrechloro-tetraethylbenzimidazol carbocyanine iodide[JC-1]、Tetramethyl rhodamine methyl ester（TMRM）等可结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。
（一）方法
将正常培养的细胞和诱导凋亡的细胞加入使用终浓度为Rhodamine 123（1mM）或终浓度为DiOC6（25nM），JC-1（1mM），TMRM（100nM），37°C平衡30min，流式细胞计检测细胞的荧光强度。
常用产品：
荧光染料JC-1(阳离子染料)与活细胞线粒体反应产生红色荧光，在凋亡细胞中，不与线粒体结合而产生绿色荧光。
JC-1的特点是：操作简单，试剂直接加入细胞中，20分钟后检测。
（二）注意事项
1、始终保持平衡染液中pH值的一致性，因为pH值的变化将影响膜电位。
2、与染料达到平衡的细胞悬液中如果含有蛋白，他们将与部分染料结合，降低染料的浓度，引起假去极化。
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发布于 ： 2018-08-03
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