蛋白质连接的问题

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蛋白质连接的问题

2004-08-15

问题描述：

这个问题困扰我多时了：
怎么样才能把一个重组的蛋白连接到一个已知的单克隆抗体之上，利用单抗的靶向作用导引重组蛋白到达靶区域，已有的基本路线有：
1.采用融合蛋白的方式，通过将重组蛋白与单抗的Fab段融合，产生的融合蛋白既具有单抗的作用，又具有重组蛋白的作用。
2.采用间接的方法，比如通过biotin标记单抗，再将avidin与重组蛋白连接，这样通过avidin与biotin之间的作用将两者连接起来。关键是如何将avidin与重组蛋白连接。
以上两个方法是我考虑的，但是均感觉难。
欢迎古怪可行的方法。：)谢谢！

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chromatography

用户

最好是能融合表达,后面的方法太复杂,要做两次连接,不好.如果要把抗体和蛋白相连,直接用蛋白交联剂就可以,你可以看看pierce公司的产品,他们有不少连接的方法.我觉得这样也许更简单点,当然蛋白和坑体的偶联也可以参考别的方法,自己做也可以.

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foolbuthard

用户

到Pierce网站上看过了，不过发现是利用活性基团之间的作用，作用于丝氨酸残疾，巯基，氨基等等，有可能使蛋白质的活性部位失效，而且连接位点不定，只要有活性残基的地方都可能，效率比较低，10％左右，所以这个方法还是不好用。现在看来还是融合蛋白方式比较好，不知各位大侠有何意见？

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bioekon

用户

我认为交联更快，更方便。交联剂的选择至关重要。我认为偶联后活性不会丧失，而且收率在20%以上，甚至可达50%以上。我经常交联蛋白质，效果很好。如果你敢兴趣，我可以帮你，仅收取部分材料费。因为如果你现在已经有了蛋白质和抗体，为什么不去试一试呢？大约也就几天的时间。而重新融合表达，不知哪年哪月了，况且重新表达的有活性与否还是个未知数。这是个人意见。

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