SDSPAGE凝胶电泳常用知识介绍
一、电泳分类
根据缓冲体系和凝胶孔径的不同，可以分为连续电泳和不连续电泳；根据样品的处理方式的不同，又可以分为变性SDS-PAGE及活性SDS-PAGE电泳，以及带有烷基化作用的还原SDS电泳；根据电泳的形式，又可以分为圆盘电泳，水平电泳，垂直电泳及平板电泳。
目前实验室常用的为不连续的变性的还原SDS-PAGE垂直电泳。
二、垂直电泳装备
三、不连续电泳
用浓缩胶（上层胶）和分离胶（下层胶）两种不同浓度，不同PH值的凝胶灌制凝胶板，通过电荷效应，浓缩效应及分子筛效应，达到蛋白质高分辨率的分离。
四、样品及各成分作用介绍
1、样品缓冲液里应包含以下部分：
SDS（十二烷基磺酸钠）
Β-巯基乙醇（BME）
溴酚蓝
丙三醇
Tris-Glycine（PH=6.8）
2、SDS作用
断裂分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，与蛋白质于一定比例结合，从而使蛋白质带上负电荷并具有相同的质合比，在电泳时迁移速率仅与分子量有关。
3、Β-巯基乙醇
阻止半胱氨酸氧化并打开二硫键
4、溴酚蓝和丙三醇
溴酚蓝是一种染料，能够与蛋白质结合显示蛋白质的运动轨迹
丙三醇的密度比水大，能够使样品沉淀到加样槽底部。
5、PAGE胶：
丙烯酰胺（Acr）：形成聚合物链
甲叉双丙烯酰胺（Bis）：交联剂，形成纵向桥架
过硫酸铵（AP）：引发剂，产生自由基
TEMED：催化过硫酸铵产生自由基，加速聚合。
五、检测：考马斯亮蓝染色和银染色
1、考马斯亮蓝染色R-250
红蓝色，每个分子含有两个SO3H，偏酸性，结合在蛋白质的碱基集团上。
2、银染色
机制：将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，使银颗粒沉积在蛋白带上。
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发布于 ： 2021-09-09
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