【求助】救命啊！大家帮我看看引物和探针设计的对吗？
2008-04-29
问题描述：
小弟最近在用realtimePCR扩增HPV16病毒（双链环状DNA病毒）的一个片段。引物和探针的设计都是参考文献的。东西设计完后做了几天实验一直不出实验结果，心中焦虑万分，怀疑是引物或是探针设计的问题。求教各位达人，能否帮小弟验证一下设计的引物和探针的合理性。
上游引物：5′-GAATGTGTGTACTGCAAGCA-3′
下游引物：5′-GTTGTATTGCTGTTCTAATGTTGT-3′
Taqman探针：5′-FAM-CAGCATATGGATTCCCATCTC-TAMRA-3′
扩增的产物长度是：195bp(nt188-382)
HPV16全长序列：贴在附件中
磕头跪谢！！！
HPV16.txt(9.91k)
*请输入10-500个字符
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whbdriver
用户
貌似有点问题，探针的TM值太低了，跟上下游引物的差不多。
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whbdriver
用户有时候文献中的引物和探针是要慎重使用的，尤其是国内的文献。在使用之前最好先用软件检测一下，或者先合引物试试。
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itisnotajoke
用户Thanks
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