Overview | PrinterFriendlyVersion |
Ex/Em(nm) | 414/508 |
MW | N/A |
CAS# | N/A |
Solvent | DMSO |
Storage | F/D/L |
Category | SuperiorLabelingDyes mFluor™DyesandKits |
Related | Generalproteins LabelingviaAminoGroups BiochemicalAssays |
Spectrum | AdvancedSpectrumViewer |
- Prepareproteinsolution(SolutionA):
Forlabeling50ugprotein(assumingthetargetproteinconcentrationis1mg/mL),mix5μL(10%ofthetotalreactionvolume)ofReactionBuffer(ComponentB)with50uLofthetargetproteinsolution.
Note1:Ifyouhaveadifferenceproteinconcentration,adjusttheproteinvolumeaccordinglytomake~50µgproteinavailableforyourlabelingreaction.
Note2:Forlabeling100ugprotein(assumingthetargetproteinconcentrationis1mg/mL),mix10uL(10%ofthetotalreactionvolume)ofReactionBuffer(ComponentB)with100uLofthetargetproteinsolution.
Note3:Theproteinshouldbedissolvedin1Xphosphatebufferedsaline(PBS),pH7.2-7.4;Iftheproteinisdissolvedinglycinebuffer,itmustbedialyzedagainst1XPBS,pH7.2-7.4,oruseAmiconUltra-0.5,Ultracel-10Membrane,10kDa(cat#UFC501008fromMillipore)toremovefreeaminesorammoniumsalts(suchasammoniumsulfateandammoniumacetate)thatarewidelyusedforproteinprecipitation.
Note4:ImpureantibodiesorantibodiesstABIlizedwithbovineserumalbumin(BSA)orgelatinwillnotbelabeledwell.
Note5:Theconjugationefficiencyissignificantlyreducediftheproteinconcentrationislessthan1mg/mL.Foroptimallabelingefficiencythefinalproteinconcentrationrangeof1-2mg/mLisrecommended. - Runconjugationreaction::
- Addtheproteinsolution(SolutionA)toONEvialoflabelingdye(ComponentA),andmixthemwellbyrepeatedlypipettingforafewtimesorvortexthevialforafewseconds.
Note:Usebothvials(ComponentA)oflabelingdyetolabel100ugproteinbydividingthe100ugproteininto2x50ugproteinandreactingeach50ugproteinwithonevialoflabelingdye.Combinetwovialsforthenextstep. - Keeptheconjugationreactionmixtureatroomtemperaturefor30-60minutes.
Note:Theconjugationreactionmixturecanberotatedorshakenforlongertimeifdesired.
- Addtheproteinsolution(SolutionA)toONEvialoflabelingdye(ComponentA),andmixthemwellbyrepeatedlypipettingforafewtimesorvortexthevialforafewseconds.
- StopConjugationreaction:
- Add5uL(for50ugprotein)or10uL(for100ugprotein)whichis10%ofthetotalreactionvolumeofTQ-DyedQuenchBuffer(ComponentC)intotheconjugationreactionmixture(fromstep2.2),mixthemwell.
- Incubateatroomtemperaturefor10minutes.
- Thelabeledprotein(antibody)isnowreadytouse.
References&Citations | CitationExplorer |
DeepSequencingAnalysisoftheEha-RegulatedTranscriptomeofEdwardsiellatardaFollowingAcidification
Authors:DGao,NLiu,YLi,YZhang,GLiu
Journal:Metabolomics(LosAngel)(2017):2153--0769
Suramininhibitscullin-RINGE3ubiquitinligases
Authors:KennethWu,RobertAChong,QingYu,JinBai,DonaldESpratt,KevinChing,ChanLee,HaibinMiao,IngerTappin,JerardHurwitz
Journal:ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences(2016):E2011--E2018
GlycosaminoglycanmimicrybyCOAMreducesmelanomagrowththroughchemokineinductionandfunction
Authors:HelenePiccard,NeleBerghmans,EvaKorpos,ChrisDillen,IlseVanAelst,SandraLi,ErikMartens,SandraLiekens,SamNoppen,JoVanDamme
Journal:InternationalJournalofCancer(2012):E425--E436
AAT Bioquest AAT Bioquest是一家位于美国的生物公司,前身为ABD Bioquest,总部位于加利福尼亚州。专门从事光学检测技术十多年,一直致力于光谱学检测领域技术的创新和突破。其独特的光学检测技术,综合了化学、生物学和信息学等各个领域的研究,引领了比色、荧光和发光技术新一代光学探针的浪潮。AAT Bioquest在全球拥有强大的经验丰富的专业分销商网络,为从小型研究机构到《财富》500强企业的各类客户提供卓越的产品和定制服务。
美国AATBioquestInc.(前身是ABDBioquest,Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域,包括吸收(颜色),荧光和发光技术。AATBioquest的产品帮助全世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学,免疫学,细胞生物学和分子生物学等领域。AATBioquest会不断介绍新产品,快速的丰富各个领域的产品。
1)我们提供反应荧光探针和发光探针,生物素和端粒酶能够应用于标记药物小分子和生物聚合物,如蛋白、核酸以及其他碳水化合物;2)我们研究并生产荧光和发光探针用于检测蛋白,核酸和活细胞。3)我们不断的推出新型的荧光和发光探针用于检测多种酶,特别是检测水解酶和氧化还原酶类;4)我们致力于开发用于信号转导研究的试剂;5)我们提供生理和神经探针,特别是钙离子指示剂和膜电位探针。
作为AATBioquestInc.的中国区域代理,艾美捷科技为中国客户提供光谱学检测领域,包括吸收(颜色),荧光和发光技术等全系列解决方案。我们也将一如既往更加努力为国内用户提供快捷、方便的高质量产品,同时更为您售前售后全面技术支持。
AATBioquest,Inc.(formerlyABDBioquest,Inc.)develops,manufacturesandmarketsbioanalyticalresearchreagentsandkitstoscientistsengagedinlifesciencesresearch,diagnosticR&Danddrugdiscovery.Wespecializeintheareaofphotometricdetectionsincludingabsorption(color),fluorescenceandluminescencetechnologies.TheCompany"sproductsenablescientistsandbiomedicalresearcherstobetterunderstandbiochemistry,immunology,cellBIOLOGyandmolecularbiology.AATBioquestconstantlyintroducesnewproducts,andoffersarapidlyexpandinglistofproductsthataregroupedintoseveralproductlines.
1)Ourreactivefluorescentandluminescentprobes,biotinsandtagenzymesareusedforlabelingsmalldrugmoleculesandbiopolymers,e.g,proteins,nucleicacidsandcarbohydrates;2)Wedevelopfluorescentandluminescentprobesfordetectingproteins,nucleicacidsandlivecells;3)Weconstantlyintroducenovelfluorescentandluminescentprobesfordetectingvariousenzymes,inparticular,hydrolyticandredoxenzymes;4)Wefocusondevelopingreagentsforsignaltransductionresearch;and5)Wealsoofferphysiologicalandneurologicalprobes,e.g.,calciumindicatorsandmembranepotentialprobes.
Besidesthestandardcatalogproductswealsooffercustomservicetomeetyourspecialresearchneeds.Ourcurrentservicesincludecustomsynthesisofcolorimetric,fluorescentandluminescentprobes,customdevelopmentofbiochemical,cell-basedanddiagnosticassaysandcustomscreeningofyourcompoundlibrariesagainstyourdefinedtargetsusingourvalidatedHTSassays.
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TUNEL的缺点是:1),操作要求高,组织样本需要固定(即使是培养细胞,也需要固定),不恰当的固定方法对实验结果影响很大,导致背景过高或者信号过弱,因此实验结果重复性不好;有的人花上半年做一个体内的TUNEL是一点都不奇怪的。2),大部分诱导凋亡的药物也引起DNA损伤,从而产生DNA断裂,易引入假阳性;3)凋亡晚期细胞基因组大量降解,导致TUNEL标记反而减少,因此此法反应的是早期凋亡比例,不能严格反应凋亡比例,属于半定量研究。
尽管有如此多缺点,但由于其是目前为数不多的能原位标记凋亡细胞的方法,因此用于组织体内凋亡研究仍然是首选。但体外细胞实验研究,很少用此法。
凋亡检测中,TUNEL并不是过时的方法,现在研究凋亡的文献仍然常见。而且相反,还比以前多一点,因为现在体内实验越来越多了,甚至线虫的凋亡研究,都用TUNEL。
凋亡研究中,的确有几种方法过时了,当然是因为有替代方案了,比如DNAladder,电镜。至于AnnexinV是不能用来和TUNEL一起评论的,前者用于细胞,而且主要是悬浮细胞,后者主要用于组织。虽然有人也做镜下的AnnexinV观察,TUNEL的细胞staining,但这都不是主流。
回到lz的原帖,的确如大家所言,做贴壁细胞,不推荐用TUNEL。如果是经典凋亡途径,只是确定比例,用最经典,最常用的subG1法即可,如果是不确定是否是凋亡,用AnnexinV,不过贴壁细胞用此法,要注意消化时间。
荧光标记物常用的有几十种,比如FITC, PE等等,各个生产厂家还有自己的专利产品
2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
5、 保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
此IBL试剂盒能用于小鼠血清,EDTA血浆,细胞上清中白介素-6的定量检测 试剂盒成分 1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T 2 酶标记抗体: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1 3 标准品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2 4 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1 5 标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1 6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1 7 终止液: 1N硫酸 12mL x 1 8 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但试剂盒没有提供) 酶标仪(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 去离子水 冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于标准品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗体和显色剂)向左转|向右转
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