| Overview |  PrinterFriendlyVersion |
| Ex/Em(nm) | 649/665 |
| MW | N/A |
| CAS# | N/A |
| Solvent | DMSO |
| Storage | F/D/L |
| Category | SuperiorLabelingDyes iFluor™DyesandKits |
| Related | Generalproteins LabelingviaAminoGroups |
| Spectrum | AdvancedSpectrumViewer |
- Prepareproteinsolution(SolutionA):
Forlabeling50ugprotein(assumingthetargetproteinconcentrationis1mg/mL),mix5μL(10%ofthetotalreactionvolume)ofReactionBuffer(ComponentB)with50uLofthetargetproteinsolution.
Note1:Ifyouhaveadifferenceproteinconcentration,adjusttheproteinvolumeaccordinglytomake~50µgproteinavailableforyourlabelingreaction.
Note2:Forlabeling100ugprotein(assumingthetargetproteinconcentrationis1mg/mL),mix10uL(10%ofthetotalreactionvolume)ofReactionBuffer(ComponentB)with100uLofthetargetproteinsolution.
Note3:Theproteinshouldbedissolvedin1Xphosphatebufferedsaline(PBS),pH7.2-7.4;Iftheproteinisdissolvedinglycinebuffer,itmustbedialyzedagainst1XPBS,pH7.2-7.4,oruseAmiconUltra-0.5,Ultracel-10Membrane,10kDa(cat#UFC501008fromMillipore)toremovefreeaminesorammoniumsalts(suchasammoniumsulfateandammoniumacetate)thatarewidelyusedforproteinprecipitation.
Note4:ImpureantibodiesorantibodiesstABIlizedwithbovineserumalbumin(BSA)orgelatinwillnotbelabeledwell.
Note5:Theconjugationefficiencyissignificantlyreducediftheproteinconcentrationislessthan1mg/mL.Foroptimallabelingefficiencythefinalproteinconcentrationrangeof1-2mg/mLisrecommended. - Runconjugationreaction::
- Addtheproteinsolution(SolutionA)toONEvialoflabelingdye(ComponentA),andmixthemwellbyrepeatedlypipettingforafewtimesorvortexthevialforafewseconds.
Note:Usebothvials(ComponentA)oflabelingdyetolabel100ugproteinbydividingthe100ugproteininto2x50ugproteinandreactingeach50ugproteinwithonevialoflabelingdye.Combinetwovialsforthenextstep. - Keeptheconjugationreactionmixtureatroomtemperaturefor30-60minutes.
Note:Theconjugationreactionmixturecanberotatedorshakenforlongertimeifdesired.
- Addtheproteinsolution(SolutionA)toONEvialoflabelingdye(ComponentA),andmixthemwellbyrepeatedlypipettingforafewtimesorvortexthevialforafewseconds.
- StopConjugationreaction:
- Add5uL(for50ugprotein)or10uL(for100ugprotein)whichis10%ofthetotalreactionvolumeofTQ-DyedQuenchBuffer(ComponentC)intotheconjugationreactionmixture(fromstep2.2),mixthemwell.
- Incubateatroomtemperaturefor10minutes.
- Thelabeledprotein(antibody)isnowreadytouse.
| References&Citations |  CitationExplorer |
Cube-shapedtheranosticpaclitaxelprodrugnanocrystalswithsurfacefunctionalizationofSPCandMPEG-DSPEforimagingandchemotherapy
Authors:FuqiangGuo,JiajiaShang,HaiZhao,KangrongLai,YangLi,ZhongxiongFan,ZhenqingHou,GuanghaoSu
Journal:ColloidsandSurfacesB:Biointerfaces(2017)
Light/magnetichyperthermiatriggereddrugreleasedfrommulti-functionalThermo-sensitivemagnetoliposomesforprecisecancersynergetictheranostics
Authors:YuxinGuo,YangZhang,JinyuanMa,QiLi,YangLi,XinyiZhou,DanZhao,HuaSong,QingChen,XuanZhu
Journal:JournalofControlledRelease(2017)
Thermo-sensitivehydrogelPLGA-PEG-PLGAasavaccinedeliverysystemforintramuscularimmunization
Authors:XiaoyanWang,YuZhang,WeiXue,HongWang,XiaozhongQiu,ZonghuaLiu
Journal:JournalofBiomaterialsApplications(2017):923--932
Affinity-ControlledProteinEncapsulationintoSub-30nmTelodendrimerNanocarriersbyMultivalentandSynergisticInteractions
Authors:XuWang,ChangyingShi,LiZhang,AlexaBodman,DandanGuo,LiliWang,WalterAHall,StephanWilkens,JuntaoLuo
Journal:Biomaterials(2016)
CarboxymethylDextran-StabilizedPolyethylenimine-Poly(epsilon-caprolactone)Nanoparticles-MediatedModulationofMicroRNA-34aExpressionviaSmall-MoleculeModulatorforHepatocellularCarcinomaTherapy
Authors:XiongweiDeng,ZhaoxiaYin,ZhixiangZhou,YihuiWang,FangZhang,QinHu,YishuYang,JianqingLu,YanWu,WangSheng
Journal:ACSappliedmaterials&interfaces(2016):17068--17079
Click-electronmicroscopyforimagingmetabolicallytaggednonproteinbiomolecules
Authors:JohnTNgo,StephenRAdams,ThomasJDeerinck,DanielaBoassa,FrancesRodriguez-Rivera,SakinaFPalida,CarolynRBertozzi,MarkHEllisman,RogerYTsien
Journal:NatChemBiol(2016):459--465
Design,synthesisandevaluationofVEGF-siRNA/CRSasanovelvectorforgenedelivery
Authors:WenZhao,YifanZhang,XueyunJiang,ChunyingCui
Journal:DrugDesign,DevelopmentandTherapy(2016):3851
MolecularBasisandConsequencesoftheCytochromec-tRNAInteraction
Authors:CuipingLiu,AaronJStonestrom,ThomasChristian,JeongsikYong,RyuichiTakase,Ya-MingHou,XiaoluYang
Journal:JournalofBIOLOGicalChemistry(2016):10426--10436
Determinationoftheactivetransportoffucoidanderivedfromokinawamozukuacrossthehumanintestinalcaco-2cellsasassessedbysize-exclusionchromatography
Authors:TakeakiNagamine,KouHayakawa,KyoumiNakazato,MasahikoIha
Journal:JournalofChromatographyB(2015):187--193
Multiplexedsingle-cellinsituRNAanalysisbyreiterativehybridization
Authors:LuXiao,JiaGuo
Journal:AnalyticalMethods(2015):7290--7295
AAT Bioquest AAT Bioquest是一家位于美国的生物公司，前身为ABD Bioquest，总部位于加利福尼亚州。专门从事光学检测技术十多年，一直致力于光谱学检测领域技术的创新和突破。其独特的光学检测技术，综合了化学、生物学和信息学等各个领域的研究，引领了比色、荧光和发光技术新一代光学探针的浪潮。AAT Bioquest在全球拥有强大的经验丰富的专业分销商网络，为从小型研究机构到《财富》500强企业的各类客户提供卓越的产品和定制服务。
美国AATBioquestInc.(前身是ABDBioquest，Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术。AATBioquest的产品帮助全世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学，免疫学，细胞生物学和分子生物学等领域。AATBioquest会不断介绍新产品，快速的丰富各个领域的产品。
1）我们提供反应荧光探针和发光探针，生物素和端粒酶能够应用于标记药物小分子和生物聚合物，如蛋白、核酸以及其他碳水化合物；2）我们研究并生产荧光和发光探针用于检测蛋白，核酸和活细胞。3）我们不断的推出新型的荧光和发光探针用于检测多种酶，特别是检测水解酶和氧化还原酶类；4）我们致力于开发用于信号转导研究的试剂；5）我们提供生理和神经探针，特别是钙离子指示剂和膜电位探针。
作为AATBioquestInc.的中国区域代理，艾美捷科技为中国客户提供光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术等全系列解决方案。我们也将一如既往更加努力为国内用户提供快捷、方便的高质量产品，同时更为您售前售后全面技术支持。
AATBioquest,Inc.(formerlyABDBioquest,Inc.)develops,manufacturesandmarketsbioanalyticalresearchreagentsandkitstoscientistsengagedinlifesciencesresearch,diagnosticR&Danddrugdiscovery.Wespecializeintheareaofphotometricdetectionsincludingabsorption(color),fluorescenceandluminescencetechnologies.TheCompany"sproductsenablescientistsandbiomedicalresearcherstobetterunderstandbiochemistry,immunology,cellBIOLOGyandmolecularbiology.AATBioquestconstantlyintroducesnewproducts,andoffersarapidlyexpandinglistofproductsthataregroupedintoseveralproductlines.
1)Ourreactivefluorescentandluminescentprobes,biotinsandtagenzymesareusedforlabelingsmalldrugmoleculesandbiopolymers,e.g,proteins,nucleicacidsandcarbohydrates;2)Wedevelopfluorescentandluminescentprobesfordetectingproteins,nucleicacidsandlivecells;3)Weconstantlyintroducenovelfluorescentandluminescentprobesfordetectingvariousenzymes,inparticular,hydrolyticandredoxenzymes;4)Wefocusondevelopingreagentsforsignaltransductionresearch;and5)Wealsoofferphysiologicalandneurologicalprobes,e.g.,calciumindicatorsandmembranepotentialprobes.
Besidesthestandardcatalogproductswealsooffercustomservicetomeetyourspecialresearchneeds.Ourcurrentservicesincludecustomsynthesisofcolorimetric,fluorescentandluminescentprobes,customdevelopmentofbiochemical,cell-basedanddiagnosticassaysandcustomscreeningofyourcompoundlibrariesagainstyourdefinedtargetsusingourvalidatedHTSassays.
ebiomall.com
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
想请问下那个公司有专门的蛋白质荧光标记试剂盒出售。最好的是CY5的，我准备做三标。性价比越高越好
那些做过的前辈们指导一下。
探针
ddH2O36.25ul
buffer(瓶3)5ul
核苷酸混合液（含DIG-dUTP）(瓶2)2.5ul
dNTPStockSolution(瓶4)2.5ul
引物F1ul(10pmol/ul)
R1ul(10pmol/ul)
酶（瓶1）0.75ul
DNA1ul（100pg）
程序：35个循环，退火温度55度。
第一次通过探针标记得到了相应的PCR标记产物，亮度和对照相当，片段大小比标记的探针模板大，证明整个过程应该没有问题。
但一个月后重新用相同的体系，相同的程序，只是探针模板的量不同却什么都扩不出来。不知道问题出在哪了！
那为什么SFDA不批准CA199CEAAFP等检测试剂盒作为癌症检测的手段呢？
TUNEL的缺点是：1），操作要求高，组织样本需要固定（即使是培养细胞，也需要固定），不恰当的固定方法对实验结果影响很大，导致背景过高或者信号过弱，因此实验结果重复性不好;有的人花上半年做一个体内的TUNEL是一点都不奇怪的。2），大部分诱导凋亡的药物也引起DNA损伤，从而产生DNA断裂，易引入假阳性;3）凋亡晚期细胞基因组大量降解，导致TUNEL标记反而减少，因此此法反应的是早期凋亡比例，不能严格反应凋亡比例，属于半定量研究。
尽管有如此多缺点，但由于其是目前为数不多的能原位标记凋亡细胞的方法，因此用于组织体内凋亡研究仍然是首选。但体外细胞实验研究，很少用此法。
凋亡检测中，TUNEL并不是过时的方法，现在研究凋亡的文献仍然常见。而且相反，还比以前多一点，因为现在体内实验越来越多了，甚至线虫的凋亡研究，都用TUNEL。
凋亡研究中，的确有几种方法过时了，当然是因为有替代方案了，比如DNAladder，电镜。至于AnnexinV是不能用来和TUNEL一起评论的，前者用于细胞，而且主要是悬浮细胞，后者主要用于组织。虽然有人也做镜下的AnnexinV观察，TUNEL的细胞staining，但这都不是主流。
回到lz的原帖，的确如大家所言，做贴壁细胞，不推荐用TUNEL。如果是经典凋亡途径，只是确定比例，用最经典，最常用的subG1法即可，如果是不确定是否是凋亡，用AnnexinV，不过贴壁细胞用此法，要注意消化时间。
暂无品牌问答
