o 细胞培养使用血清浓度为2%~5%,由于国内血清质量差异,建议使用前进行细胞培养筛选,并建议实际使用血清浓度不低于3% 。o BHK21细胞可直接用4~5%血清浓度培养基进行转瓶细胞培养,培养初期可能细胞培养状态略差,适应几代后能良好生长。o 如用方瓶进行4~5%血清浓度培养基进行几代适应培养后再进行转瓶培养,细胞培养效果更好。o 如依次用10%血清浓度、8%血清浓度、5%血清浓度、3%血清浓度传代适应细胞,细胞培养效果更好。o 如用4~5%血清浓度培养基进行BHK21细胞适应培养后,冻存适应的细胞建立低血清细胞种子库,用该库细胞复苏进行低血清培养,细胞培养效果更佳。o 用于培养的细胞培养液应按产品说明书标示量加入碳酸氢钠,配液后pH为7.2~7.4;培养液如常时间搅拌或长期存放,pH可能增加;用于培养细胞的培养液,pH为7.4~7.6,一般情况下不影响细胞培养效果。不可随意减少或增加碳酸氢钠的使用量,否则影响培养液的缓冲能力和渗透压。o 用于细胞消化的细胞消化液,应现配现用,或冻存使用,应注意消化液细胞消化效果,应在2~3分种内完成细胞消化。o 应控制细胞消化的时间和细胞消化液的加量,倒去细胞消化液时,细胞应附着良好,放置1~2分种后,细胞能自然滑落,应避免细胞成片垮掉。o 初次用于低血清传代的种细胞质量,对于传代成功性极为重要;应选择良好的细胞用于低血清适应培养,应当在细胞刚生长为致密单层时即传代,传代时细胞培养液pH应保持6.8~7.0左右,传代2~3代后,作为种细胞用于低血清细胞培养。o 控制细胞传代分种比例是成功培养的关键之一。初次用于低血清传代的种细胞,分种比例建议用1:4~1:6,待细胞完全汇合后略微生长为致密单层即传代,之后可适当增加传代分种比例至1:6~1:9。o 控制细胞传代生长的pH是成功培养的关键之一。细胞培养液pH降低到6.8~7.0,应及时传代。o 控制细胞传代生长状态是成功培养的关键之一。细胞培养第1天细胞汇合率应为40%~80%,培养第2天应为单层细胞,细胞生长为致密单层应及时传代,不可延长细胞培养时间。o 控制细胞传代生长时间是成功培养的关键之一,通常培养2天应及时传代。o 按以上程序和注意事项进行BHK21细胞低血清培养,如细胞不能正常贴壁培养,应考虑细胞瓶质量,建议用新的细胞培养瓶按正常程序处理后进行细胞培养;或考虑BHK21细胞质量,更换低代次或不同来源BHK21细胞进行细胞培养。o 转瓶低血清培养BHK21细胞,细胞培养液中通常可见油膜状物或白膜状物出现,以及较多悬浮细胞,均为正常的细胞悬浮培养物,不影响细胞培养生长。o BHK21细胞低血清培养,通常生长为单层细胞,该细胞具有更好的细胞活力,与传统的复层细胞比较,能更好的支持病毒培养,不影响病毒滴度。o BHK21细胞低血清培养,细胞培养致密单层后接种口蹄疫病毒,维持液为乳欧液或低血清培养基,病毒接种培养工艺同大生产;但由于不同厂家病毒培养工艺的差异,可能导致病毒收获时间的差异,建议接种病毒后每2~3小时取样,检测病毒滴度,确定病毒收获时间。 编辑: tong202 来源:清大天一