CCK8 细胞增殖与毒性检测试剂盒_蚂蚁淘，【正品极速】生物医学科研用品轻松购|ebiomall -蚂蚁淘商城

商品列表技术文章相关问答

当前位置： > 首页 > 技术文章 >

CCK8 细胞增殖与毒性检测试剂盒

来自 : mayitao

提供商：	锐赛生物
服务名称：	细胞功能实验服务

CCK-8细胞增殖与毒性检测试剂盒

CellCountingKit-8UserManual

产品简介:

CCK-8试剂盒，是种基于WST-8的泛应于细胞增殖和细胞毒性的快速灵敏度检测试剂盒。
WST-8是种类似于MTT的化合物，在电耦合试剂1-MethoxyPMS存在的情况下，可以被还原成橙黄溶性的甲臜(Formazan)(图1)。细胞增殖越多越快，则颜越深;细胞毒性越，则颜越浅。对于同样的细胞，颜的深浅和细胞数呈线性关系。

图1.WST-8分结构式及其检测原理

产品优势:

本试剂盒提供了种灵敏度、操作简便、使安全的细胞增殖与毒性检测法。与传统的MTT实验相具有明显的优势:

CCK-8法是于细胞因等诱导的细胞增殖检测，也可以于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或些药物诱导的细胞长抑制检测等与细胞活性和增殖相关的实验的种灵敏度，放射性的检测法。
CCK-8法对细胞毒性，可多次测定选取最佳测定时间，与MTT 法相线性范围更宽，灵敏度。
CCK-8溶液不需配制，可以直接加到细胞样品中，即开即，MTT更加稳定，实验结果重复性好，适合规模，通量的样品检测。
MTT实验成的formazan不是溶性的，需要使DMSO等有机溶剂溶解; 本法产的formazan是溶性的，不仅省去了溶解步骤，更因此减少了该操作步骤带来的误差。

产品包装:

贮藏条件:

CCK-8溶液在避光、0-5°C的条件下可以保存1年，若长期不可在-20°C下避光保存2年。建议分装后保存于-20°C，使时提前于

4°C解冻，请避免反复冻融，否则增加背景值，扰实验结果。

电话:021-6419733Email:service@research-bio.com 址:www.research-bio.com

所需的设备及耗材:

1. 10ul、100-200ul以及多通道移液器2. 酶标仪(带有450nm滤光)3. 96孔培养板4. CO2培养箱

使用方法:

在96孔板中接种细胞悬液(100ul/孔)，通常细胞增殖实验每孔约2000个细胞，细胞毒性实验每孔约5000个细胞，具体每孔所的细胞的数，需根据细胞的，细胞增殖速度的快慢等因素决定)。

每孔加10ulCCK-8溶液。如果起始的培养体积为200ul，则需加20ulCCK-8溶液，以此类推。可以加相应量细胞培养基和CCK-8但不加细胞的孔作为空对照，若担所使的药物会扰检测，需设置加相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但不加细胞的孔作为空对照。
在细胞培养箱内继续孵育1-4 时，具体时间可以通过预实验确定。预实验时可以在0.5、1、2和4 时后分别酶标仪检测，然后选取吸光度范围较适宜的个时间点于后续实验。
酶标仪测定在450nm处的吸光值，若450nm滤光，可以使420-480nm的滤光。如果样品为浑浊度的细胞悬液，可以使于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进双波长测定。

注意事项:

使96孔板进检测时，如果细胞培养时间较长，请注意蒸发问题。可将96孔板外围圈加培养基、或PBS保湿。同时，可以把96孔板置于培养箱内靠近盘的位置以缓解蒸发。

培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少不同。在正式实验前，建议先做预实验摸索铺板的细胞数量以及加CCK-8试剂后的培养时间。
铺板时请注意保证每个孔细胞数量均匀，建议铺板过程中注意时常混匀，防因细胞沉淀造成不均匀。加CCK-8后请前后左右轻轻晃动培养板数次，使培养基和CCK-8溶液充分混匀。
本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待测物质有氧化性或还原性，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基，去掉药物的影响。若药物影响较的情况可以不更换培养基，直接扣除培养基中加药物后的空吸收即可。

参考献:

andcytotoxicityassays.MosmannT(1983).JournalofImmunologicalMethods.65:  55–63.

Ahighlywater-solubledisulfonatedtetrazoliumsaltasachromogenicindicatorforNADHaswellascellviability,Talanta44,1299-1305,1997.
AVitalRoleforApe1/Ref1ProteininRepairingSpontaneousDNADamageinHuman  Cells,MolecularCell,17,463-470,2005.