一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）:溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。10mol/L乙酸胺（ammoniumacetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。0.5mol/LEDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA•2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。1mol/LHEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。1mol/LHCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。25mg/mlIPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。1mol/LMgCl2:溶解20.3gMgCl2•6H2O于足量的水中，定容到100ml。100mmol/LPMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20℃。20mg/ml蛋白酶K（proteinaseK）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－freeRNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。100％三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）2.5％X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。100×Denhardt试剂（Denhardt’sregent）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量2%聚蔗糖（Ficoll，400型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA（组分V）水2g2g2g加水至总体积为100ml,依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。10×标准DNA连接酶缓冲液（standardDNAligasebuffer）（粘端、平端连接）成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/LTris-HCl:5ml1mol/L贮液,100mmol/LMgCl2:1ml1mol/L贮液,100mmol/LDTT:1ml1mol/L贮液,2mmol/LATP:200ul100mmol/L贮液,5mmol/L盐酸亚精胺（可选）:50ul1mmol/L贮液,0.5mg/mlBSA（组分V）（可选）:0.5ml10mg/mL贮液,水:2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃。100mmol/LdNTP溶液（dNTPsolutions）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。10mmol/LdNTP混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/LdATP10mmol/LdCTP10mmol/LdGTP10mmol/LdTTP水2ul100mmol/LdATP贮液2ul100mmol/LdCTP贮液2ul100mmol/LdGTP贮液2ul100mmol/LdTTP贮液12ul20％PEG8000/2.5MNaCl成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20％聚乙二醇2.5mol/L氯化钠水20g50ml5mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠补足100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20×SSC成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L柠檬酸三钠（二水）3mol/L氯化钠水88.2g175.3g补足1L溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10NNaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水加100ulDEPC于100ml水中，使DEPC的体积分数为0.1％。在37℃温浴至少12h，然后在15psi条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。甲酰胺（deionizedformamide）直接购买或加DowexXG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（phosphatebuffer）按照下表所给定的体积，混合1mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1mol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4•H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。1mol/L磷酸二氢钠（ml）1mol/L磷酸氢二钠（ml）最终pH值TE（用于悬浮和贮存DNA）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/LTris－HCl1mmol/LEDTA水1ml1mol/LTris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）200ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）98.8mlTris缓冲液（Tris-HClbuffer）将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。浓盐酸的体积（ml）pH