请使用支持JavaScript的浏览器! +,Lucigen/OverExpress C43(DE3) pLysS Chemically Competent Cells/60448-1/12 rxns (SOLOs),转录表达,Lucigen,Lucigen,,12 rxns (SOLOs)蚂蚁淘商城
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Lucigen/OverExpress C43(DE3) pLysS Chemically Competent Cells/60448-1/12 rxns (SOLOs)
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Lucigen/OverExpress C43(DE3) pLysS Chemically Competent Cells/60448-1/12 rxns (SOLOs)
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  • ExpressgenesclonedintoanyT7vectorwiththeseBL21(DE3)derivatives
  • Effectiveinexpressingtoxic&membraneproteins
  • Citedinover350researcharticles
  • InterestedinacompetentE.colistrainforroutineproteinexpression?Lookhere

E.coliBL21(DE3)strains,likeLucigen’sE.cloni®EXPRESSCompetentCellsprovidereliableexpressionofmanygenesclonedintoT7expressionvectors(e.g.,pETorLucigen’spSMART®-CDNAvectors).However,insomecasesexpressionisminimalornotdetectablebecausetherecombinantprotein,whenexpressed,isdeleteriousorlethaltothesestandardBL21strains.Examplesofsuchtoxicproteinsincludemanymembraneproteins,somecytoplasmicproteins,andnucleases.Unfortunately,successfulexpressionofoneormoretoxicproteinsisoftenimportanttotheexperimentalgoal.

Lucigen’sOverExpressElectrocompetentandChemicallyCompetentCellsareE.colistrainsthatareeffectiveinexpressingtoxicproteinsfromallclassesoforganisms,includingeubacteria,yeasts,plants,viruses,andmammals.Theeffectivenessofthesenewstrainsinexpressingtoxicproteinshasbeenvalidatedinmorethan350publications.

TheOverExpressstrainscontaingeneticmutationsphenotypicallyselectedforconferringtolerancetotoxicproteins.ThestrainC41(DE3)wasderivedfromBL21(DE3).Thisstrainhasatleastonemutation,whichpreventscelldeathassociatedwithexpressionofmanyrecombinanttoxicproteins.ThestrainC43(DE3)wasderivedfromC41(DE3)byselectingforresistancetoadifferenttoxicproteinandcanexpressadifferentsetoftoxicproteinstoC41(DE3).Figure1graphicallyillustratestheadvantagesoftheOverExpressCompetentCells,comparedtostandardBL21(DE3)cells,inexpressingtoxicproteins.

Figure1.GreenFluorescentProtein(top)orRedFluorescentProtein(bottom)expressedfromaT7promoterconstructthatwastransformedintoC41,BL21,orC43competentcellsspreadonIPTGplatestoinduceproteinexpression.


Table1andFigure2summarizetransformationeffectiveness,toleranceofexpression-inducedtoxicity,andproteinexpressionforT7expressionplasmidscodingforavarietyofrecombinantproteins.TheseresultsdemonstratethattheOverExpressC41(DE3)andC43(DE3)strainsareclearlysuperiortotheparentalBL21(DE3)intransformationandexpressionoftoxicproteins.

Table1.ComparisonofOverExpressC41(DE3)andC43(DE3)cellswiththeparentalstrainBL21(DE3)intransformationandexpressionofheterologousproteins.**

Strain
Transformation
SuccessRatea
Expression-inducedToxicityb
ExpressingPlasmidsc
BL21(DE3)
16/26(62%)
25/26(96%)
14/26(54%)
C41(DE3)
28/28(100%)
14/28(50%)
24/28(86%)
C43(DE3)
28/28(100%)
1/28(4%)
23/28(81%)

Figure2.ComparisonofOverExpressC41(DE3)andC43(DE3)cellswiththeparentalstrainBL21(DE3)intransformationandexpressionofheterologousproteins.**

aTransformationsuccesscorrespondstothepresenceofcoloniesonLB+ampicillinagarfollowingtransformationwithaplasmid.
bExpressiontoxicitycorrespondstotheabsenceofcoloniesonLB+ampicillin+IPTGagarfollowingtransformationwithaplasmid.
cExpressingplasmidscorrespondstoobservationofaheterologousproteininthetotalcellpelletonCoomassie-stainedSDS-PAGEfollowinggrowthofacolonyinLB+ampicillinmediumandinductionwithIPTG.
**L.Dumon-Seignovert,G.Cariot,andL.Vuillard(2004).ProteinExpressionandPurification37,203-206.Datausedwithpermission.


AsinstandardBL21(DE3)strains,OverExpressC41(DE3),C41(DE3)pLysS,C43(DE3),andC43(DE3)pLysSarelysogensof&lamBDa;DE3.ThesestrainscarryachromosomalcopyoftheT7RNAPolymerasegeneunderthecontrolofthelacUV5promoter.ThesestrainsaresuitableforproductionofproteinfromtargetgenesclonedintoT7-drivenexpressionvectors.OverExpressC41(DE3),C41(DE3)pLysS,C43(DE3),andC43(DE3)pLysSarealsodeficientinthelonandompTproteases.

OverExpressC41(DE3)pLysSandC43(DE3)pLysSalsocarryachloramphenicol-resistantplasmidthatencodesT7lysozyme,whichisanaturalinhibitorofT7RNApolymerase.CellscontainingpLysSproduceasmallamountofT7lysozyme.ThesestrainsareusedtosuppressbasalexpressionofT7RNApolymerasepriortoinduction,thusstABIlizingrecombinantsencodingparticularlytoxicproteins.


FAQWhichOverExpresscellstrainshouldIuse?

ItisdifficulttopredictwhichofthefourOverExpressstrains–C41(DE3),C43(DE3),C41(DE3)pLysS,orC43(DE3)pLysS–willworkbestinexpressingagivenprotein.WerecommendinitiallyusingtheOverExpressComboPack™whichcontains3reactionseachofthefourOverExpresscompetentcellstrains,todeterminewhichoneisbestforyourapplication.TheOverExpressstrainsareavailableaselectrocompetentorchemicallycompetentcells.

Becausetherearenointrinsicantibioticresistances(orplasmids)ineitherC41(DE3)orC43(DE3),thestrainscanbedifferentiatedfromeachotherandfromBL21(DE3)bytransformationwithastrainverificationvector,pAVD10.pAVD10containstheuncFgene(encodingthebeta-subunitofE.coliATPase)underthecontroloftheT7promoter.ThisplasmidislethaltoBL21(DE3)andtoinducedC41(DE3),butitistoleratedbyC43(DE3)regardlessofinduction.pAVD10isprovidedwithOverExpressCells.

ORDERINFORMATION

EachOverExpresskitcontainsElectrocompetentorChemicallyCompetentCellsinSOLOpackaging(1transformationpertube),ExpressionRecoveryMedium(lactoseminus),pUC19PositiveControlPlasmid,pAVD10VerificationPlasmid,andcompleteprotocols.ComboPackscontain3reactionseachofchemicallycompetentC41(DE3),C43(DE3),C41(DE)pLysS,andC43(DE3)pLysS.
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近日,一项刊登在国际杂志Genome Medicine上的研究报告中,来自斯坦福大学医学院的研究人员通过研究发现,免疫细胞的基因表达或许能够有效预测机体对流感的易感性,文章中,研究者表示,表达KLRD1的自然杀伤细胞或许能作为机体对流感易感性的特殊生物标志物。 研究者Erika Bongen说道,这项研究中我们对四项独立流感挑战研究中来自全血转录组数据中的免疫细胞的比例进行了评估分析,随后对在三项队列研究中接种流感疫苗之前有症状脱落者... 查看更多>
2、核酸提取及相关服务 2-1 、 DNA 类提取: ( 1 )人、大鼠、小鼠各种组织、细胞、血液的小、中、大量的全基因组 DNA 提取。 ( 2 )细菌的小、中、大量的基因组 DNA 提取。 ( 3 )酵 查看更多>
以前只要提到基因表达分析,人们就会想到荧光定量PCR;只要提到高通量基因表达分析,人们会首先想到基因芯片。虽然荧光定量PCR仪几乎每个实验室都有,但是做芯片就不一定每个实验室都具备这个条件了。 查看更多>
2021-07-20
中国将开发自主知识产权肿瘤基因表达谱芯片 查看更多>
玉米果穗顶部籽秕粒瘪或未结籽粒,称之为秃顶,又叫“秃尖”,是玉米生产中常见的现象,一般会导致玉米减产5%~10%,严重的甚至在30%以上。造成玉米秃尖有品种的遗传因素,但也受到种植密度和干旱胁迫等环境条件的影响。近日,为了解析玉米秃尖的分子生理机制,阿根廷布宜诺斯艾利斯大学的科研人员系统研究了杂交品种、播种密度和灌溉条件对玉米秃尖的影响。进一步地,研究人员在同步人工授粉后的2-6天内,收集果穗籽粒样本研究其基因表达模式并分析籽粒的糖份含... 查看更多>
下面的方案分成 3 个阶段:用 pTet-tTAk 稳定转染成纤维细胞,稳定转染可诱导表达 tTA 的 NIH-3T3 细胞,分析转染细胞中的蛋白表达。稳定转染细胞系表达反式激活因子和靶基因分为两个阶段。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。 查看更多>
低温电子显微镜技术 - 本月早些时候MRC科学家Richard Henderson博士获得诺贝尔奖 - 现已被用于解决对基因表达至关重要的蛋白质复合物的结构。在新窗口发表于Scienceopens的论文中,研究人员表示,该结构指出人类流感病毒如何能够破坏细胞的基因表达机制。该研究由Lori Passmoreopens博士在MRC分子生物学实验室的新窗口中领导,是第一个揭示蛋白质重要部分结构的研究,称为裂解和聚腺苷酸化因子(CPF)。CPF是由许多亚基组成的复合酶。冷冻电子显微镜已经彻底 查看更多>
棉花干旱抗逆胁迫新基因表达及特征分析,采用基因枪轰击的方法,用包裹质粒的金粉对洋葱表皮进行轰击,发现GaMYB2-GFP 的融合表达载体只能在细胞核中能看到绿色荧光,这进一步证明该蛋白不具有跨膜蛋白结构,定位在细胞核中,具有转录因子的一般特征。 查看更多>
化 学 调 控 靶 基 因 转 录 的 方 法 有 很 多 种 ,最 常 见 的 是 利 用 影 响 转 录 因 子 活 性 的 别 构 调节 物 进 行 调 控 。其 中 的 一 个 方 法 是 运 用 二 聚 化 的 诱 导 剂 或 者 二 聚 体 在 无 活 性 的 融 合 蛋 白上 重 组 有 活 性 的 转 录 因 子 。最 常 用 的 体 系 是 将 天 然 产 物 雷 帕 霉 素 (r a p a m y d n ) 或 者 无生物 活 性 的 类 似 物 作 为 二 聚 化 的 药 物 。 查看更多>
Clusterin是一种由CLU基因编码的蛋白质,它在大多数人体组织中表达,特别是在压力下,它有助于保护细胞。 由开罗大学男科和性学系的Taymour Mostafa领导的一个埃及研究小组发现,不育男性的精子中CLU的表达要高得多。 Mostafa和他的同事检查了124名男性的精液样本,其中一些人的精子活力降低,精子细胞形状异常或精子数量低。与健康精子的男性相比,他们发现精子功能障碍男性的凝聚素蛋白及其mRNA前体水平显着升高。他们还发现凝聚素水平与精子质量密切相关,因此CLU的表达越 查看更多>
大约15亿年前,小小的游客来到细胞内,后来演变成所有的植物和动物 - 包括人类。.这些访客是线粒体,小细胞器,其突出的作用是产生90%的化学能细胞需要存活。从进化的角度来说,人类,动物和植物因此是两种生物的组合。线粒体有自己的DNA,但人类线粒体中的13个基因 - 以及tRNA,rRNA和一些小肽的DNA序列 - 大大超过人类核中的20,000个基因。然而,根据伯明翰阿拉巴马大学病理学教授斯科特巴林格博士的初步研究,这些细小的线粒体可能对细胞代谢和对心力衰竭或肥胖等代谢性疾病的易感性产生强烈影响 查看更多>
嘉美生物是一家主要从事Annexin V,信号转导抗体,重组人和动物蛋白,磷酸化抗体,各种动物ELISA试剂盒,生物实验服务等研发与销售的高科技生物公司,免费热线:400-698-4168。 查看更多>
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고려해운123
qiouxianan2021-08-02
一般来说,是一个意思。因为大部分产物都是蛋白质,所以一般来说二者含义相同。
但严格来说,还是有区别的。因为基因的表达产物包括蛋白质和RNA(rRNA和tRNA)。如果产物是蛋白质,就是转录翻译;如果产物是RNA,就只是转录过程,没有翻译过程。

最近导师要求做一个关于PARP家族蛋白在肝癌和癌旁组织中转录以及表达情况的初步研究,以确定目前的课题是否有很大价值。我之前一直在做湿实验,没有生信背景,所以对这个工作比较头疼。我不会编程,所以直接上网查找有没有可以在网上直接进行分析的网站。我一开始是上cbioportal上对肝癌的mRNA转录谱进行分析,但网站里面提供的对照是一个所谓的标准正常人。我没查到这个所谓的标准正常人是什么,而且导师说肝癌可能存在个体差异,所以要求用肝癌及其对应的癌旁组织的转录谱和表达谱进行分析。我上GEO搜索癌旁组织(paracanceroustissue),根本什么想要的结果都没有。我现在完全是一头雾水,无从下手,希望有做相关领域工作的前辈们或是做与之类似的工作的前辈们提供指导,非常感谢!

基因转录 123
罗特DSkn32021-07-26
在RNA聚合酶的催化下,以DNA为模板合成mRNA的过程称为转录(transcription)。在双链DNA中,作为转录模板的链称为模板链(template strand)或反义链(antisense strand);而不作为转录模板的链称为编码链(coding strand)或有义链(sense strand),编码链与模板链互补,它与转录产物的差异仅在于DNA中的胸腺嘧啶(T)变为RNA中的尿嘧啶(U)。在含许多基因的DNA双链中,每个基因的模板链并不总是在同一条链上,亦即可作为某些基因模板链的一条链,同时也可以是另外一些基因的编码链。
转录后要进行加工,转录后的加工包括: 几乎全部的真核 mRNA 端都具“帽子”结构。虽然真核生物的mRNA的转录以嘌呤核苷酸三磷酸(pppAG或pppG)领头,但在5’端的一个核苷酸总是7-甲基鸟核苷三磷酸(m7GpppAGpNp)。mRNA 5’端的这种结构称为帽子(cap)。不同真核生物的mRNA具有不同的帽子。
mRNA的帽结构功能:①能被核糖体小亚基识别,促使mRNA和核糖体的结合;②m7Gppp结构能有效地封闭RNA 5’末端,以保护mRNA免疫5’核酸外切酶的降解,增强mRNA的稳定性。 (postranslational processing):从核糖体上释放出来的多肽需要进一步加工修饰才能形成具有生物活性的蛋白质。翻译后的肽链加工包括肽链切断,某些氨基酸的羟基化、磷酸化、乙酰化、糖基化等。真核生物在新生手肽链翻译后将甲硫氨酸裂解掉。有一类基因的翻译产物前体含有多种氨基酸顺序,可以切断为不同的蛋白质或肽,称为多蛋白质(polyprotein)。例如胰岛素(insulin)是先合成86个氨基酸的初级翻译产物,称为胰岛素原(proinsulin),胰岛素原包括A、B、C三段,经过加工,切去其中无活性的C肽段,并在A肽和B肽之间形成二硫键,这样才得到由51个氨基酸组成的有活性的胰岛素。向左转|向右转
我请请教一下,如何验证一个转录因子在细胞内是否表达。我将细胞抽提RNA,逆转录后扩出该转录因子的基因,是否就可以表明该转录因子在该细胞内是表达的?因为是菜鸟,很多都不懂。请各位多多指教,不胜感激。
翻译,基因表达调控123
爪机粉丝008B22021-07-30
这句话翻译成英文是:Genes are expressed by transcription and translation, and what controls transcription
1.模板不同:复制的模板是DNA的两条链,转录的模板是DNA的一条链。2.产物不同:复制的产物是DNA,转录的产物是RNA。3.原料不同:复制需要的原料是脱氧核苷酸,转录的原料是核糖核苷酸。4.需要的酶不一样:复制需要DNA聚合酶,转录需要RNA聚合酶。

请教各位,我是做在体实验,在体给予刺激30分钟后观察蛋白的表达变化,结果是蛋白表达升高,但有人质疑30分钟这么短的时间能否真的引起蛋白表达的明显变化,所以请教各位,一般蛋白从转录到表达需要多长时间?

遗传物质的表达过程包括:转录和翻译两个过程
遗传物质的表达的产物是:蛋白质
DNA转录的产物是:mRNA
希望对你有帮助~
转录组分析概述123
杀生丸EIO2018-02-26
转录组是指某个物种或特定细胞在某一生理功能状态下,细胞内所有转录的mRNA产物的集合,包含了时间和空间的限定,是连接基因组遗传信息与生物功能的蛋白质组的必然纽带。转录水平的调控是目前研究最多的,也是生物体最重要的调控方式。
  应用高通量技术进行转录组测序是一种快捷可靠的获取转录组信息的方法。mRNA的转录本表达分析,通过获得研究对象基因组转录区域的信息,鉴定转录发生位点,可变剪切等,其精确的计数方法更可对基因进行精确的定量分析。

大家好,本人实验小白一枚,目前在寻找自己的毕业课题,有个实验问题想请教论坛里面的各位大侠。前期的实验证明某个转录因子具有抑癌作用,在正常肝脏组织中高表达,在肝癌组织中低表达,在HepG2,SMMC-7721等肝癌细胞株中缺失表达。我现在想用染色质免疫共沉淀结合高通量测序的方法筛选它的下游基因,由于在肝癌细胞株中缺失表达,我可以构建一个过表达转录因子的质粒到肝癌细胞株中做染色质免疫共沉淀吗?或者还有更好的方法筛选下游基因吗?谢谢!

 单等位基因表达(monoallelicgeneexpression)是指在二倍体生物的细胞中一个基因的全部转录本均来自一个等位基因的现象。群体水平的细胞表达谱分析(bulkanalysis)表明,印记效应与等位基因间的相互抑制作用是产生单等位基因表达的两种可能的机制。由于群体水平的分析可能低估了单细胞内单等位基因表达的普遍程度,单细胞水平的研究可以更加全面地揭示细胞内的单等位基因表达现象。

  

  中国科学院遗传与发育生物学研究所多个课题组以水稻叶肉细胞为对象,合作研究并揭示了植物中存在广泛的单等位基因表达。焦雨铃研究组将单细胞转录组的测定技术(single-cellRNA-seq)应用于植物细胞,并成功获得了两个水稻亚种(93-11和Nipponbare)及其正反交后代(F1)的叶肉细胞的单细胞表达谱。钱文峰和王秀杰研究组利用93-11和Nipponbare亚种之间的单核苷酸多态性估计出F1细胞中两个等位基因的表达量。通过比较等位基因的表达量,定义出细胞中单等位基因表达的基因。结果表明,单个细胞中约三分之二的基因是单等位基因表达的。进一步研究发现,等位基因表达的独立性和随机性能够很好地解释细胞中单等位基因表达的现象。该研究在单细胞水平上揭示了单等位基因表达现象的普遍性和可能的机制,为进一步研究细胞内基因表达调控规律奠定了基础。

  

  上述研究成果于2017年9月23日在线发表于ScienceBulletin(DOI:10.1016/j.scib.2017.09.011)。焦雨铃研究组已毕业的博士生韩莹莹和钱文峰研究组的博士生楚霄为该文章的共同第一作者。焦雨铃和钱文峰为该文章的共同通讯作者。王秀杰研究员参与了课题合作。该研究得到了科技部973项目、中组部“万人计划”和植物基因组学国家重点实验室的资助。

  

  图:水稻叶肉细胞呈现出广泛的单等位基因表达


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这个词表示“将思想文字化”或是“用本国语言将外语抄写、誊录”
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