【实验求助】检测凋亡的caspase通路是选择WB还是酶活试剂盒
2021-08-06
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shylook
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展开引用futuo1988 RT,本人打算检测某细胞株的抗凋亡能力,经文献查询应该是内源性细胞凋亡通路,所以我打算检测一下caspase 9, caspase 3/7, 以及cleaved PARP现在问题来了,文献中有的人是砸的western,有的是用的caspase酶活试剂盒(caspase 9/3/7 activity kit),我现在不知道应该选择哪种方式了......western嘛就是实验条件比较成熟,但是涉及一大堆什么total caspase, cleaved caspase之类的东东;酶活试剂盒没用过,可能得慢慢摸条件....就价格来讲,两种方法花费差不多请教各位做信号通路的大神,给我点建议吧,谢谢!......显然自己买抗体做 apoptosis cst有卖一套抗体的你也可以选择total cleaved都能检测的抗体都很好用的尤其是PARP1
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futuo1988
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shylook显然自己买抗体做apoptosisCST有卖一套抗体的你也可以选择totalcleaved都能检测的抗体都很好用的尤其是PARP1谢谢!我的小老板意思也是砸WB比较好....再追问一个小问题哈,如果检测两个细胞株的抗凋亡能力不同,通过检测caspase9caspase3和PARP可以足够说明问题了吗?另外在比较的过程中是仅仅比较cleaved后的caspase呢,还是total.cleaved都要做上去?
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shylook
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futuo1988谢谢!我的小老板意思也是砸WB比较好....再追问一个小问题哈,如果检测两个细胞株的抗凋亡能力不同,通过检测caspase9caspase3和PARP可以足够说明问题了吗?另外在比较的过程中是仅仅比较cleaved后的caspase呢,还是total.cleaved都要做上去?首先作为凋亡指标totalcleaved都要做另外有抗体两个都识别就用一个抗体不能的就得买total和cleaved两个比较凋亡能力首先cleavedcaspase&PARP1是要做的,有可能一定程度上可以反应差别(主要是cleaved的多少);但有时单靠这个可能做不出区别,因为每个细胞对凋亡的敏感性不一样,也就是说,有时即使cleavedcasps多了,细胞也没有凋亡或者比较弱。真正比较简单能比较两株细胞凋亡差异的是做流式,因为它能检测出凋亡细胞占总细胞的比例。
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