WesternBlottingHRPSubstrate
lumigenECLExtra(TMA-3)isaproprietaryacridanbasedchemiluminescentsubstrateforhighlysensitivedetectionofWesternblottedandELISAcapturedproteinsthatareboundtohorserADIshperoxidase(HRP)labeledantibodies.
- Veryrapidonsetofchemiluminescence-imagescanberecordedinseconds
- Excellentsensitivity-lowpicogramtomidfemtogram
- Reducedantibodyusage-morethan10-foldreductionintheusageofexpensiveantibodyconjugates
- Temperatureinsensitive-analyticalresultsareinsensitivetotemperaturesfrom22°C-35°Creducingtheneedforprecisetemperaturecontrol
- Sustainedsignalduration -overseveralhoursallowsconvenientimaging
StableWorkingSolution
AsignificantfeatureofLumigenECLExtraisitsexcellentstABIlity.Unlikemostotherchemiluminescentperoxidasesubstrates,theworkingsolutionisstableatroomtemperatureforatleastoneweekandat2-8°Cforatleastonemonth.Withthisstability,theworkingsolutioncanbepreparedandstoredforlateruse.
RapidPeakIntensity
ReactionofthesubstratewithHRPenzymegeneratesrapidluminescenceofveryhighintensitywithinseconds.Peakintensityoflightemissionoccursat440nm.
ProductSpecifications
ebiomall.com
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之前是担心所需组织量不够(要求是200-300mg,我的组织只有20mg左右)才跑不出来,后来换用大鼠心脏测试,组织量绝对够。。。而且在跑western之前进行了说明书上的蛋白浓缩步骤,可是在加loADIngbuffer之后,蛋白沉淀怎么都溶解不掉~说明书也注明了如果有沉淀可以取上清继续上样,可是每次上样感觉样品往上浮,只有部分样品往孔里沉,而且跑出来什么都没有,连内参都没有。用的是β-actin的内参。。
western之前浓缩步骤如下:
1、取所得提取物,每100ul膜蛋白加入约300ul的溶解buffer和约100ul三氯乙酸(TCA)试剂,混匀后置冰上20-30min后,13000rpm,离心15min,尽可能去除上清。
2、沉淀加入1ml丙酮,室温静置10min后,13000rpm离心15min。
3、弃上清,沉淀真空旋干或置冰上干燥10min(敞开离心管盖),按适当体积比加入loadingbuffer(使用前没100ulloadingbuffer加入2-5ulβ-巯基乙醇)溶解,彻底分散(枪头反复吹吸或剧烈涡旋),煮沸5min。【注:加入loadingbuffer后如有部分难容物,可取上清继续上样。】
一、广口瓶。
广口瓶是用于盛放固体试剂的玻璃容器,有透明和棕色两种,棕色瓶用于盛放需避光保存的试剂(例如硝酸银等大部分硝酸盐)。广口瓶一般用于存放试剂,瓶口内部磨砂,用于与瓶塞配合使用。
取用试剂时,瓶塞要倒放在桌上,用后将塞塞紧,必要时密封。由于瓶口内侧磨砂,一般跟玻璃磨砂塞配套,因而玻璃塞的广口瓶不能盛放强碱性试剂。如果盛放碱性试剂,要改用橡皮塞,因为强碱与玻璃中的二氧化硅反应,生成硅酸盐,使口与塞粘连。
二、细口瓶。
一种用于存放液体试剂的玻璃容器,细口方便液体倾倒,并且能够避免试剂挥发,因此口比较小。有透明和棕色两种,棕色瓶用于盛放需避光保存的试剂。
取用试剂时,瓶塞要倒放在桌上,用后将塞塞紧,必要时密封。由于瓶口内侧磨砂,一般跟玻璃磨砂塞配套,因而不能盛放强碱性试剂。如果盛放碱性试剂,要改用橡皮塞。
原液分装。抗体孵育之前稀释。
做WB的浓度不一定需要很高的。可以设置简单梯度1:200;1:500;1:1000 。看结果再优化
当然做都是可以做,需要带上阴性和阳性的对照组,以区别出是抗体制备的问题还是抗原决定簇被破坏的问题。
原理简介:
本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞,离心吸附柱内的硅基质膜在高盐,低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐,高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
注意事项:
◆ 第一次使用时,将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后(终浓度100ug/ml)置于4℃保存。如果溶液P1中RNase A失活,提取的质粒可能会有混杂有微量RNA残留, 这时可在溶液P1中补加RNase A即可。
◆ 第一次使用前请先在15ml漂洗液WB中加入45ml无水乙醇,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
◆ 温度低时溶液P2中SDS可能会出现浑浊或者析出沉淀,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。
◆ 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
试剂盒特点:
◆ 产量高---一次提取高达30ug以上的质粒。
◆ 纯度高---OD260/OD280一般为1.80~1.85本试剂盒提取的质粒纯度好,能充分保证测序所需要的读长(用于ABI3730测序一般可达1000bp有效读长)。
◆ 快速,方便,不需要使用有毒的苯酚,氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。
提示
BIOTEKE的质粒提取试剂盒既适用于革兰氏阴性菌中质粒的提取,同时也可从革兰氏阳性菌中提取质粒。由于革兰氏阳性菌外被一层较厚的细胞壁,会严重阻碍细菌细胞的裂解,因此必须在裂解细胞前破除,方法如下:
收集适量的菌体,加入250ul溶液P2,充分悬浮菌液,加入溶菌酶使其终浓度在10-20mg/ml左右在37℃处理30分钟左右。加入溶菌酶的浓度和处理的时间可根据不同的菌主和具体实验条件进行调整。
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