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如果MRNA5‘或3’端有复杂的二级结构,怎样可使反转录酶到达末端?
2021-08-14
问题描述:

我用的是CLONTECH公司的反转录试剂盒,他分两步进行,以便为接下来的RACE作基础。试剂盒提供的有阳性对照MRNA,我的实验样本和对照一起做下去(反转录—RACE)。电泳结果是阳性对照扩出了预期大小的片段,我的标本没东西出来。我有几点想不清楚,请各位指教:1如何判断我的样本反转录是否成功,即反转录酶能到达5’或3‘的末端。2如果5’或3‘末端GC含量高,是不是要换用可耐高热的反转录酶,有这种酶吗?3是不是5’或3‘末端二级结构很复杂,高温也打不开,有什么其他的办法吗?4对于扩增全长,各位有什么好方法吗?眼看就要开题了,实验还毫无结果,真不知道是不是要延期毕业了!!!

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agct
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复杂二级结构可以考虑用thermoscript这样的酶不过你前面的帖子似乎不是RT的问题
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