请使用支持JavaScript的浏览器! 【求助】如何保证得到的cDNA片段中没有反转录酶引起的突变存在?_蚂蚁淘商城
【求助】如何保证得到的cDNA片段中没有反转录酶引起的突变存在?
2021-07-27
问题描述:

如题

反转录酶没有3-5外切活性,其保真度怎么保证呢?

大家做表达的时候,获取长CDNA片段怎么保证的呢?

我获得的2.5kb的片段,其中sequencing后发现有8个错突变,狂ft

高保真的KOD-PLUS扩增的,按道理说,PCR没这么夸张吧

请大家指点啊

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kingoldfive
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没人问津啊,自己顶一下各位用过的一定给帮忙啊,很困惑的说
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zhangyefmmu
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Invitrogen的SuperscriptII或IIIKIT都是很好的反转录试剂盒,我用着感觉不错另外,您用的是反转录后的CDNA直接为模版进行PCR的,这样CDNA不一定很完整,直接P2.5KB的片断可能出现产量小或者错误多的情况。建议您将片断分成两段PCR后酶切连接。本人意见,仅供参考
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cuilinzhiniao11
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--------------------------------------------------------------------------------不好意思上面有句话写错了是不是M-MLV反转录酶都有末端加C的功能啊?
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shixinyuesheng
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我也想知道答案,没钱买试剂盒。
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