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Anoptimizedreversetranscriptasesystemfortheproductionoffull-lengthCDNA.
Producefull-lengthcDNAwithRNAseH-mutant- Achievehigherspecificityatelevatedtemperatures,upto55°C
EpiScript™RnaseH-ReverseTranscriptase(EpiScriptRT),analternativetoSuperScript®IIReverseTranscriptase,isarecombinantMMLVreversetranscriptasewithgreatlyreducedRNaseHactivity.Itishighlyefficientatproducingfull-lengthcDNAfromlongRNAtemplates.EpiScriptRTiscapableofproducingcDNAfromaslittleas50pgoftotalRNAforreal-timeRT-PCR(qRT-PCR)analysisandotherapplications.
Applications
- First-strandcDNAsynthesisforsubsequentPCRorreal-timePCR.
Benefits
- RecombinantMMLVreversetranscriptasewithgreatlyreducedRNaseHactivity
- Activeattemperaturesupto55°C
- Highlyefficientatproducingfull-lengthcDNAfromaslittleas50pgoftotalRNA
- BestvalueinanRNaseH-ReverseTranscriptase
Storage:Storeonlyat-20°Cinafreezerwithoutadefrostcycle.
StorageBuffer:EpiScriptRTissuppliedina50%glycerolsolutioncontaining50mMTris-HCl(pH7.5),100mMsodiumchloride,1mMDTT,0.1mMEDTA,and0.1%Triton®X-100.
UnitDefinition:OneunitofEpiScriptRTcatalyzestheincorporationof1nmolofdTTPintoacid-insolublematerialin10minutesat37°Cusingsaturatingamountsofoligo(dT)-primedpoly(rA)astemplate.
ContaminatingActivityAssays:EpiScriptRTisfreeofdetectableexonuclease,endonuclease,andRNaseactivities.
Figure1.EpiScript™ReverseTranscriptaseperformedequallyorbetterthancomparablereversetranscriptasesfromothervendors.First-strandsynthesisreactionswereassembledaccordingtomanufacturer´sspecifications.InputRNAwas1µgofJurkattotalRNA(Ambion®).Reactionswereprimedusing50ngofpoly-T(16-18)DNA.2ndstrandqPCRwasperformedusingBio-RadiQSYBRmastermixandgene-specificprimersthatyielded250-350bpamplicons.Reactionswererepeated4-fold.PGDF-R(PlateletDerivedGrowthFactorReceptor),TNF(TumorNecrosisFactor),IL-1b(Interleukin-1beta),IL-2(Interleukin2).ImagecourtesyofMatthewKellinger,Illumina®Inc.
 |  | Figure2(clicktoenlarge).EpiScript™ReverseTranscriptaseproducessimiliartranscriptcoverageindependentoftranscriptlength.EpiScriptwasusedtoprimefirststrandcDNAeitherfromtotalRNAusingoligo-dT(leftpanel)orpolyA+selectedRNAwithrandomhexamers(rightpanel).ThecDNAwasconvertedintoIllumina®-compatIBLelibrariesandsequenced.Thereadswerealignedtotranscriptsbaseduponvariouslengthclassesandreaddensityplottedrelativetothepercentdistancefromthe5´endofthetranscripts;0%referstothe5´endand100%isthe3´end.Asexpected,oligo-dTprimingresultsinamorepronounced3´biasthanrandompriming. |
 | Figure3.UseofEpiScript®ReverseTranscriptaseforfirststrandcDNAresultsindetectionofsimilartranscriptcategoriesindependentofinputamount.EpiScriptRTwasusedtorandomprime5ngor50pgofhumantotalRNAandthecDNAwasconvertedintolibrariesforIllumina®sequencing.ReadswerealignedusingTophatandannotatedwithCufflinksandthepercentageofeachmajorcategoryisvisualizedasapiechart.Equivalentresultsareobservedforboth5ngand50pgofinputRNA. |
ORDERINFORMATION
Contents:EpiScriptRNaseH-ReverseTranscriptase,10XReactionBuffer,100mMDTT.蚂蚁淘电商平台
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
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运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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2021-09-17
北京智杰方远科技有限公司在发布的反转录酶III试剂盒供应信息，浏览与反转录酶III试剂盒相关的产品或在搜索更多与反转录酶III试剂盒相关的内容。 查看更多
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2021-09-04
用T4噬菌体DNA聚合酶标记双链DNA的3'端的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。 查看更多
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2021-09-12
技术文章AMV和M-MuLV在应用上的区别更多逆转录酶文章请点击：http://www.e1617.com/nizhuanlumei-2191/... 查看更多
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2021-08-30
反转录酶M-MLV使用说明（Promega） 1、产品简介莫洛尼鼠白血病病毒反转录酶（M-MLV RT）是一种RNA依赖的DNA聚合酶，能使mRNA（>5kb）转录为cD 查看更多
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2021-09-13
日前，美国最高法院裁定，天然的人类基因 DNA 序列不能申请专利，但是人工合成的、去除了内含子序列的 cDNA 不是自然产物, 因此仍有申请专利的资格。 对医学影响有限 这个裁定主要围绕 BRCA1 和 BRCA2 基因的专利效用，该基因的突变可大大增加个体罹患乳腺癌和卵巢癌的风险。美国犹他州的巨数遗传公司是第一个对这两个基因进行测序的公司，并在 1996 年申请了专利，从 查看更多
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2021-09-14
2013 年 12 月，中国报道了首例人感染 H10N8 甲型禽流感病毒死亡病例，患者为一名 73 岁女性，临床诊断为重症肺炎，并伴有高血压、心脏病、重症肌无力等基础性疾病，免疫水平低下，有活禽市场暴露史。患者住院 9 天后因呼吸衰竭、休克死亡，所有密切接触者未出现异常。 从该例患者体内分离出的 H10N8 型禽流感病毒亚型通常见于迁徙性鸟类以及活禽市场，虽然尚未肯定人 查看更多
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2021-09-11
随着生物技术的发展，肿瘤临床的早期诊断、鉴别诊断、有效观察及预后监测越来越受益于肿瘤分子标志物的发现及其检测方法的完善。肿瘤患者外周血循环核酸分子的检测成为研究者关注的热点。已有研究证实肿瘤患者外周血循环 DNA 具有和恶性肿瘤相关的分子生物学特征，可作为敏感高效的肿瘤分子标志物。近期文献发现外周血循环 RNA 也存在同样的变化，检测这些来自 查看更多
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2021-09-23
在DNA重组中,催化形成重组DNA分子的酶是 A.拓扑异构酶 B.DNA连接酶 C.解链酶 D.DNA聚合酶 E.反转录酶 请帮忙给出正确答案和分析,谢谢!... 查看更多
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2021-09-07
上海高创化学科技有限公司在发布的Taq DNA聚合酶 反应缓冲液供应信息，浏览与Taq DNA聚合酶 反应缓冲液相关的产品或在搜索更多与Taq DNA聚合酶 反应缓冲液相关的内容。 查看更多
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2021-09-21
基因工程的关键技术是脱氧核糖核酸的连接和重组，在此过程中一些酶起着至关重要的作用，这些酶统称为基因工程工具酶。工具酶种类繁多、功能各异，主要包括限制酶、聚合酶、连接酶、修饰酶和核酸酶五大类。其中，以限制性核酸内切酶和DNA连接酶在分子克隆中的作用最为突出。这些酶具有特异... 查看更多
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2021-09-05
Biomatik 小鼠肉瘤病毒逆转录酶,200U/ul M-MuLV Reverse Transcriptase, 200U/ul(A1111) 品牌:Biomatik 货号:A1111 默瑞(上海)生物科技有限公司 上海 诚信值:... 查看更多
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2021-09-18
AMV反转录酶；Promega原装；M5101是由北京索莱宝科技有限公司代理或销售的solarbio品牌的试剂，产品来源于solarbio。北京索莱宝科技有限公司是中国最权威的AMV反转录酶；Promega原装；M5101试剂销售服务商之一，在北京等地方销售AMV反转录酶；Promega原装；M5101试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业AMV反转录酶；Promega原装；M5101仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的AMV反转录酶；Promega原装；M5101产品 查看更多
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逆转录四个大步骤热点千牛作业网123
碎裂v42018-03-26
1、使用前每个组份轻轻混匀，然后2000rpm离心20s
2、取灭过菌且无核酸酶的0.2ml离心管，依次加入2～5μgRNAnμL
3、65℃保温5min，然后冰浴5min；
4、往3步骤中的0.2ml离心管依次加入下列组份
RNase抑制剂（40u/μL）0.5μL
10×M-MLVReactionBuffer2μL
DTT（200mM）1μL
逆转录酶（M-MLV）1μL
5、轻轻混匀后，然后2000rpm离心20s；
6、先在37℃保温1hr，然后70℃保温15min；
7、上述产物可立即进行下一步的PCR反应或-20℃保存。向左转|向右转
2、取灭过菌且无核酸酶的0.2ml离心管，依次加入2～5μgRNAnμL
3、65℃保温5min，然后冰浴5min；
4、往3步骤中的0.2ml离心管依次加入下列组份
RNase抑制剂（40u/μL）0.5μL
10×M-MLVReactionBuffer2μL
DTT（200mM）1μL
逆转录酶（M-MLV）1μL
5、轻轻混匀后，然后2000rpm离心20s；
6、先在37℃保温1hr，然后70℃保温15min；
7、上述产物可立即进行下一步的PCR反应或-20℃保存。向左转|向右转
RNA反转录 分子生物 综合其他论坛学术科研互动平台123
2018-02-28
底物应该指的是dNTP吧，以RNA为模板，在反转录酶的作用下合成cDNA。
【求助】大片段DNA(6.4K)与载体连接所需的载体,反转录酶,PCR聚合...123
weile_02021-08-05
各位大侠：小弟最近做个长片段的CDNA与T载体的连接，片段大小6.4K，载体选用的是pUC19和pGEMT-easy,反转录酶用的是RevertAidTirstStrandcDNASynthesisKit(#K1621)，CDNA第二链的扩增用的是LATaq。我是用纯病毒的RNA做模板，操作步骤严格按照说明做的，也曾经有一次获得过电泳图清晰显示的是全长6.4KB左右的片段，与载体连接，结果筛选到的几个克隆，插入的片段仅有2KB左右，奈何？可最近几次再用此反转录试剂盒却不能得到所需片段。在此，小弟想问问大家，你们是否遇到同样的问题，是如何解决的？所用的试剂（载体和酶的选择）和方法是什么，可以告诉后来者，共同进步吧。
反转录酶AMV使用说明（Promega）123
luoyu202021-08-02
如题，我现在有AMV反转录酶，但是我发现DDRTPCR都是用MMLV反转录酶来做的，不知道用AMV可以吗，哪位师兄师姐知道给小弟指点指点，小弟先谢过了。
人有反转录酶吗,有什么作用 123
zhou431_4312021-08-17
【求助】如何保证得到的cDNA片段中没有反转录酶引起的突变存在?...123
kingoldfive2021-07-27
利用rtpcr(反转录酶)克隆pvycp基因 道客巴巴123
水星xia07572018-03-17
1． Money 鼠白血病病毒（MMLV）反转录酶：有强的聚合酶活性，RNA酶H活性相对较弱。最适作用温度为37℃。
2． 禽成髓细胞瘤病毒（AMV）反转录酶：有强的聚合酶活性和RNA酶H活性。最适作用温度为42℃。
3．Thermus thermophilus、Thermus flavus等嗜热微生物的热稳定性反转录酶：在Mn存在下，允许高温反转录RNA，以消除RNA模板的二级结构。
4．MMLV反转录酶的RNase H突变体：商品名为SuperScript 和SuperScriptⅡ。此种酶较其它酶能多将更大部分的RNA转换成cDNA，这一特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的mRNA模板合成较长cDNA。向左转|向右转
2． 禽成髓细胞瘤病毒（AMV）反转录酶：有强的聚合酶活性和RNA酶H活性。最适作用温度为42℃。
3．Thermus thermophilus、Thermus flavus等嗜热微生物的热稳定性反转录酶：在Mn存在下，允许高温反转录RNA，以消除RNA模板的二级结构。
4．MMLV反转录酶的RNase H突变体：商品名为SuperScript 和SuperScriptⅡ。此种酶较其它酶能多将更大部分的RNA转换成cDNA，这一特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的mRNA模板合成较长cDNA。向左转|向右转
AMV,MMLV,SSⅢ三种逆转录酶哪有什么不同123
E澈烾2018-03-30
反转录酶（Reverse transcripatse）是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA（cDNA）的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条多肽链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上亚基结构。真核生物中也都分离出具有不同结构的反转录酶。
RTPCR中为何在逆转录结束后要让逆转录酶失活?123
tyc31492021-08-06
反转录酶在进行pcr反应前须进行高温失活，不然就会影响pcr扩增。
反转录时所需的酶是反转录酶,那不需要DNA聚合酶吗123
东林加油0363352018-04-05
RT-nPCR实际叫做反转录-巢式PCR，反转录PCR就是把RNA提取后反转录成cDNA，并以其为模板进行的PCR反应，通常用于检测某种RNA是否被表达，或者比较其相对表达水平巢式PCR（nested PCR），是指利用两套PCR引物（巢式引物）对进行两轮PCR扩增反应。在第一轮扩增中，外引物用以产生扩增产物，此产物在在内引物的存在下进行第二轮扩增。由于巢式PCR反应有两次PCR扩增，从而降低了扩增多个靶位点的可能性（因为与两套引物都互补的引物很少）增加了检测的敏感性；又有两对PCR引物与检测模板的配对，增加了检测的可靠性。所以反转录-巢式PCR就是以cDNA为模板进行的巢式PCR，它和简单的反转录PCR一样是用于检测某种RNA是否被表达，或者比较其相对表达水平，但是特异性更高，可靠性更强。
反转录酶的注意事项123
灰太狼咳卫2352021-08-01
反转录酶
在进行RT反应之前，应考虑以下几个方面：
1、RNA
成功的cDNA合成来自高质量的RNA，高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂，如EDTA或SDS。在提取RNA的过程中，要特别防止RNase的污染，同时在逆转录反应中经常加入RNase抑制剂以增加cDNA合成的长度和产量。RNase抑制剂要在第一链cDNA合成反应中，在缓冲液和还原剂（如DTT）存在的条件下加入，因为cDNA合成前的过程会使抑制剂变性，从而释放结合的可以降解RNA的RNase。蛋白RNase抑制剂仅防止RNaseA，B，C对RNA的降解，并不能防止皮肤上的RNase，因此尽管使用了这些抑制剂，也要小心不要从手指上引入RNase，实验过程中经常更换新手套。
2、引物的选择
OligodT
选择OligodT时，要求RNA必须有PolyA，所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT，所以对RNA样品的质量要求较高，最好不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应，建议推荐使用OligodT引物。使用OligodT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。
随机引物
适合各种RNA的RT，尤其适合模板丰度很低的情况（比如某个gene表达量很低）。选择随机引物时，第一链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板，然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系，一般建议每5μg总RNA的随机引物的用量为50ng，如果每5μg总RNA的随机引物的用量超过250ng，可能会导致小片段产物（<500bp）的增加和长片断、全长产物产物的降低。
特异性引物
特异性引物只能用你设计引物时的下游引物做RT，引物设计质量影响RT的结果，而且不同引物退火温度本来就不相同，所以按照说明书按照一个温度做不是最佳选择，一般不推荐。向左转|向右转
在进行RT反应之前，应考虑以下几个方面：
1、RNA
成功的cDNA合成来自高质量的RNA，高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂，如EDTA或SDS。在提取RNA的过程中，要特别防止RNase的污染，同时在逆转录反应中经常加入RNase抑制剂以增加cDNA合成的长度和产量。RNase抑制剂要在第一链cDNA合成反应中，在缓冲液和还原剂（如DTT）存在的条件下加入，因为cDNA合成前的过程会使抑制剂变性，从而释放结合的可以降解RNA的RNase。蛋白RNase抑制剂仅防止RNaseA，B，C对RNA的降解，并不能防止皮肤上的RNase，因此尽管使用了这些抑制剂，也要小心不要从手指上引入RNase，实验过程中经常更换新手套。
2、引物的选择
OligodT
选择OligodT时，要求RNA必须有PolyA，所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT，所以对RNA样品的质量要求较高，最好不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应，建议推荐使用OligodT引物。使用OligodT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。
随机引物
适合各种RNA的RT，尤其适合模板丰度很低的情况（比如某个gene表达量很低）。选择随机引物时，第一链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板，然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系，一般建议每5μg总RNA的随机引物的用量为50ng，如果每5μg总RNA的随机引物的用量超过250ng，可能会导致小片段产物（<500bp）的增加和长片断、全长产物产物的降低。
特异性引物
特异性引物只能用你设计引物时的下游引物做RT，引物设计质量影响RT的结果，而且不同引物退火温度本来就不相同，所以按照说明书按照一个温度做不是最佳选择，一般不推荐。向左转|向右转
INTERNATIONAL SERVICE OIL :: Καλώς ήρθατε123
MLIUGLDA83G2018-03-28
那你做表达量的时候就不准了啊 不加DNA酶将原有的DNA消化掉，那么你做RT-PCR这个就没意义了 逆转录得到的cDNA和原有的DNA是一样的序列
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