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钟绿zhonglu
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实时荧光定量PCR用什么试剂盒比较好呢：我荧光定量试剂盒有很多种，其实是用这些样品仪器试剂材料都是大同小异~不过最大的区别在于后期耗材的专用性~这个是非常值得考虑的，不要理那些推销员说的，还是要结合你的工作， 是用现成试剂盒还是自己开发？标本量多大？检测对象是已知还是未知的？上面的确定后，再来看要值得注意的地方：比如说实验中耗材最烧钱的，逆转录试剂盒里面逆转录酶量少用的最快，一旦用完就要买新的试剂盒。SybGreen每个副孔要5ul，每个基因要3副孔（为了检测重复性），每个标本要设置内参基因，所以如果你做一个目的基因，每个标本就有6个副孔，跑一次荧光PCR要30ul，做两个的话就有9个副孔，跑一次要45ul。通常有用SYBR Green Mix做的，但是这里建议你用EvaGreen做，灵敏度和平行性都要好于SYBR Green，并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。荧光PC讲究操作精细，所以刚开始你做的标本几乎就是练手，结果误差（CP Error）会很大，肯定要重跑，有些跑个3、4次也是有的哦。
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