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AAT Bioquest/Amplite™ Fluorimetric Maleimide Quantitation Kit *Green Fluorescence*/5523/200 Tests
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AAT Bioquest/Amplite™ Fluorimetric Maleimide Quantitation Kit *Green Fluorescence*/5523/200 Tests
品牌 / 
aatbio
货号 / 
5523
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Ex/Em(nm)490/515
MWN/A
CAS#N/A
SolventN/A
StorageF/D/L
CategoryProteinBiochemistry
Generalproteins
RelatedBiochemicalAssays
Avarietyofcrosslinkingreagentswithamaleimidegrouparewidelyusedforcrosslinkingproteinstoproteinsorproteinstootherbiomolecules.Therearefewreagentsorassaykitsavailableforquantitatethenumberofmaleimidegroupsthatareintroducedintothefirstprotein.Allthecommercialkitshavetediousprotocols.Ourkitusesaproprietarydyethathasenhancedfluorescenceuponreactingwithamaleimide.Thekitprovidesasensitive,one-stepfluorimetricmethodtodetectaslittleas10picomoleofmaleimideina100µLassayvolume(100nMinconcentration).Theassayisrapidandrobust.Itcanbeperformedinaconvenient96-wellor384-wellmicrotiter-plateformatandeasilyadaptedtoautomationwithEx/Em=490nm/520nm.Thekitprovidesaconvenientprotocolwithalltheessentialreagents.Fortherapidquantificationofaproteinmaleimidegroupwerecommendyouuse#5526.Forthequantificationofananoparticlemaleimidegroupwerecommendyouuse#5525.

Thisprotocolonlyprovidesaguideline,andshouldbemodifiedaccordingtoyourspecificneeds.

1.Prepare500XMaleimideGreen™stocksolution:

Add20µLofDMSO(ComponentE)intotheMaleimideGreenvial(ComponentA)tomake500Xstocksolution.

Note:10µLofthestocksolutionisenoughforone96-wellplate.TheunusedMaleimideGreen™stocksolutionshouldbedividedintosingleusealiquots,storedat-20oCandkeptfromlight.

2.Prepare20Xmaleimidereactionmixture:

Add10µLof500XMaleimideGreen™stocksolution(fromStep1)into250µLReactionBuffer(fromComponentB),andmixthemwell.Incubatethe20Xmaleimidereactionmixtureatroomtemperaturefor30min,protectedfromlight.

Note1:Itisveryimportanttoincubatethe20Xmaleimidereactionmixtureatroomtemperatureforatleast30mintomaximizethesignaltobackgroundratio.

Note2:YoushouldseetheyellowcolorafteraddingtheMaleimideGreen™stocksolutionintoreactionbuffer.

 

3.Preparemaleimideassaymixture:

Addthewholecontentsof20Xmaleimidereactionmixture(260µLfromStep2)into5mLofassaybuffer(ComponentC),andmixwell.

Note:Thismaleimideassaymixtureisnotstable.Usewithin1hour.

 

4.PrepareserialdilutionsofN-ethylaleimidestandard(0to10μM):

4.1   Add10μLof10mM(10nmol/µL)N-ethylmaleimidestandardstocksolution(ComponentD)to990µLofassaybuffer(ComponentC)togenerate100µM(100pmol/µL)N-ethylmaleimidestandardsolution.

Note:Theunused10mMN-ethylmaleimidestandardsolutionshouldbedividedintosingleusealiquotsandstoredat-20oC.

 

4.2   Take200μLof100μMN-ethylmaleimidestandardsolution(fromStep4.1)toperform1:3serialdilutionstoget30,10,3,1,0.3,0.1and0μMserialdilutionsofN-ethylmaleimidestandard.

 

4.3   AddN-ethylmaleimidestandardsandmaleimide-containingtestsamplesintoasolidblack96-wellmicroplateasdescribedinTables1and2

 

Table1.LayoutofN-ethylmaleimidestandardsandtestsamplesinasolidblack96-wellmicroplate

BL

BL

TS

TS

….

….

 

 

 

 

 

 

MS1

MS1

….

….

….

….

 

 

 

 

 

 

MS2

MS2

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

MS3

MS3

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

MS4

MS4

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

MS5

MS5

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

MS6

MS6

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

MS7

MS7

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Note:MS=N-ethylmaleimideStandards,BL=BlankControl,TS=TestSamples.

 

Table2.Reagentcompositionforeachwell

N-ethylmaleimideStandard

BlankControl

TestSample

SerialDilutions*(50μL)

AssayBuffer:50μL

50μL

*Note:AddtheserialdilutionsofN-ethylmaleimidestandardfrom0.1μMto100μMintowellsfromMS1toMS7induplicate.

 

5.Runmaleimideassay:

5.1   Add50μLofmaleimideassaymixture(fromStep3)toeachwelloftheN-ethylmaleimidestandard,blankcontrol,andtestsamples(seeStep4.3)tohavethetotalmaleimideassayvolumeof100µL/well.

Note:Fora384-wellplate,add25μLofsampleand25μLofmaleimidereactionmixtureintoeachwell.

 

5.2   Incubatethereactionmixturefor5to30minutesatroomtemperature,protectedfromlight.

Note:Forbestresults,thefluorescenceintensityshouldbereadwithin30minutesduetothefactthatthefluorescencebackgroundincreaseswithtime.

 

5.3   MonitorthefluorescenceincreasewithafluorescenceplatereaderatEx/Em=490/520nm.

References&Citations
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Conjugationwithaninulin-chitosanadjuvantmarkedlyimprovestheimmunogenicityofMycobacteriumtuberculosisCFP10-TB10.4fusionprotein
Authors:WeiliYu,TaoHu
Journal:MolecularPharmaceutics(2016)

ModeratePEGylationofthecarrierproteinimprovesthepolysaccharide-specificimmunogenicityofmeningococcalgroupApolysaccharideconjugatevaccine
Authors:TingtingZhang,WeiliYu,YanfeiWang,TaoHu
Journal:Vaccine(2015):3208--3214

Rapidquantificationofmaleimideinbioconjuatedsamplesusinganovelcolorimetricmethod(TECH2P.761)
Authors:JinfangLiao,HaitaoGuo,ZhenLuo,QinZhao,JackDiwu
Journal:TheJournalofImmunology(2015):206--7

Successfulacquisitionofaneutralizingmonoclonalantibodyagainstanovelneutrophil-activatingpeptide,mitocryptide-1
Authors:TatsuyaHattori,KentaNakashima,TakayukiMarutani,YoshiakiKiso,YoshisukeNishi,HidehitoMukai
Journal:Biochemicalandbiophysicalresearchcommunications(2015):54--59

CD133-targetedpaclitaxeldeliveryinhibitslocaltumorrecurrenceinamousemodelofbreastcancer
Authors:SureshKumarSwaminathan,EmilieRoger,UdayaToti,LinNiu,JohnROhlfest,JayanthPanyam
Journal:JournalofControlledRelease(2013):280--287

PEGasaspacerarmmarkedlyincreasestheimmunogenicityofmeningococcalgroupYpolysaccharideconjugatevaccine
Authors:QingruiHuang,DongxiaLi,AijunKang,WenqiAn,BeiFan,XiaoweiMa,GuanghuiMa,ZhiguoSu,TaoHu
Journal:JournalofControlledRelease(2013):382--389


AAT Bioquest AAT Bioquest是一家位于美国的生物公司,前身为ABD Bioquest,总部位于加利福尼亚州。专门从事光学检测技术十多年,一直致力于光谱学检测领域技术的创新和突破。其独特的光学检测技术,综合了化学、生物学和信息学等各个领域的研究,引领了比色、荧光和发光技术新一代光学探针的浪潮。AAT Bioquest在全球拥有强大的经验丰富的专业分销商网络,为从小型研究机构到《财富》500强企业的各类客户提供卓越的产品和定制服务。


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LAMP 法与镜检法、PCR 法诊断疟疾准确性的比较 自 19 世纪 80 年代以来,外周血涂片镜检法一直是诊断疟疾的金标准。而快速抗原测定试验(RDT)从 20 世纪 90 年代早期就被用来诊断疟疾,促进了疟疾快速诊断的发展。虽然 RDT 和镜检已经满足了疟疾流行人群中病人管理的要求,但是,人们越来越关注于发展诊断无症状低密度寄生虫个体的方法。PCR 法敏感度高但是耗时长,常需 查看更多>
Epigentek代理甲基化定量试剂盒 促销,Epigentek代理甲基化定量试剂盒8折促销 查看更多>
采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠ANA单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的ANA与单抗结合,加入酶标抗体,形成免疫复合物连接在板上,加入酶底物TMB,出现蓝色,加终止液硫酸,颜色变 查看更多>
产品描述1.准确灵敏, 线性范围广,BCA试剂的蛋白质测定范围是20-2000ug/ml。2.快速:45分钟内完成测定,比经典的Lowry法快4倍而且更加方便。3.经济实用:在微孔板中进行测定,可大大节约样品和试剂用量。4.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。保存条件: BCA试剂 A, B 室温保存,蛋白标准品-20℃保存... 查看更多>
 在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。前文(2.2)已述,ELISA中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物。  完整的ELISA试剂盒包含以下各组分:(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);(3)酶的底物;(4)阴性对照品和阳性对照 查看更多>
【摘要】:影响ELISA中非特异性显色的原因很多,如试剂盒特异性、检验标本中含酶标记物的干扰物,操作过程中的问题。本文就这一原因作一简要分析,以便可以通过以上措施把非特异显色降至最低限度,从而提高检测的特异性,并得到更准确、可靠的实验结果。 【关键词】ELISA非特异性显色 酶联免疫吸 查看更多>
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实验室经常经费把的比较死,所以试剂能省就省,一般是国产,因为要做荧光定量,所以买了天根的试剂盒FP202,不知道效果如何啊!
bca法测定蛋白质浓度时,需要用参比溶液调0么,像平时测吸光度都需要先用参比溶液调0再测,看试剂盒说明书好像没说到要调0的,其次稀释液是不是用裂解液合适呢,另外做了标准曲线后,在562nm下比色,这比色的步骤是什么呢
ELISA是利用抗原抗体之间专一性结合的特性,对样本进行检测的实验方法,通过底物显色深浅代表待测物在样本中含量的多少。
定性ELISA只能粗略表示样本待测物含量在某个特定值以上或以下,定性ELISA通常设置阳性对照(P)、和阴性对照(N),结果分别用“阴性”和“阳性”表示。ELISA定性测定的“阴性”和“阳性”的判断标准是试剂盒所确定的阳性判断值,即cut-off值。
定量ELISA是通过一系列不同已知浓度的标准品所对应的OD值做出标准曲线,然后将样本的OD值代入标准曲线,计算出样本中待测物的含量。百特纯大分子Meretciel的定量ELISA试剂盒还可以。
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会2013年的《临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》,有需要的战友自行下载。

临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证.pdf(17431.6k)
根据样品数量,A液和B液按50:1混合,配制适量BCA工作液,充分
混匀;b)完全溶解蛋白标准品,取10μl稀释至100μl0.9%NaCl或PBS,使终浓度为
0.5mg/ml。
请问哪里可买到二肽酶DPPIV和GLP-1定量试剂盒.急,
谢谢谢
如果你想做荧光定量PCR的根据实验思路来说应该需要一下试剂和仪器模板提取(一般为RNA):Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水2.模板浓度测定:分光光度计或NanoDrop

3.逆转录:逆转录试剂盒(或者一步法试剂盒),这一步可以用普通PCR做,也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂:通常有用SYBR Green Mix做的,但是这里建议你用EvaGreen做,灵敏度和平行性都要好于SYBR Green,并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他:除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板(Axygen反应比较好)、移液枪等,暂时就想到这么多。
请教国产的HBVDNA定量试剂盒1IU等于多少拷贝?到底是5.6还是1?
试剂盒有不同规格的,最小的是48样的,还有96样的,也就是买一个试剂盒够测48个样的。
试剂盒里有详细的说明书,告诉你样品需要多少量,每个试剂需要加入多少量,和详细的实验步骤,一般买来就可以用,不用人教。
所以你问一个样需要多少量是没法回答的,测定过程是要加很多种试剂的。
LOD就是 limit of detection
LOQ-定量限LOD-检测限
中国疾病预防控制中心招标很多都是广州健仑生物科技有限公司供应的,希望可以帮到你
如何选择实时荧光定量的试剂盒好加入荧光标记探针,巧妙地把核算扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一起,借助于荧光信号来检测PCR产物。一方面提高了灵敏度,另一方面还可以做到PCR每循环一次就收集一个数据,建立实时扩增曲线,准确地确定CT值,从而根据CT值确定起始DNA的拷贝数,做到真正意义上的DNA定量。另外由于CT值是一个完全客观的参数,CT值越小,模版DNA的起始拷贝数越小。因此,利用CT值确定DNA拷贝数实时PCR方法比普通终点定量方法更加准确
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