小分子单抗制备为什么有效价但是没有竞争

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小分子单抗制备为什么有效价但是没有竞争

2017-03-01

问题描述：

目前在做小分子单克隆抗体，免疫后一定时间断尾取血测效价。测得的血清有效价，加标品之后没有一点竞争？？？
感觉很困惑，有效价不就是说明产生了抗体么，为什么这个抗体一点也抓不住标品小分子？？？
非常迷惑，整个单抗制备过程感觉不受自己把握和控制，非常没有安全感啊

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橙枫

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dxy_iwkuo6g 做的小分子四环素的单抗，免疫小鼠用的是偶联BSA的四环素，包板用的是偶联OVA的四环素。进行了6次免疫，包板浓度5ug/ml，5免和6免后测得效价大概6w，但是加标品进去，标品和抗体没有结合能力。准备重新合成全抗原，但是不知道怎么设计比较科学，看论坛说小分子单抗，全抗原合成很关键，可我不知道怎么去做你的标准品应该是和偶联了bsa或者ova的四环素抗原结合的，和你四环素单抗应该是竞争关系，标准品和单抗应该是不会结合的。按你的说法，我理解的是，你的情况：1.你加不同梯度抗体后，读值有变化，证明抗体有校价；2.在固定抗体量不变，你加入梯度标准品后，反应读值没有明显的变化；原因可能有以下几点：1.你的标准品是否过期，还有没效价？是否能和你的ova抗原反应？建议：做下标准品和抗原的反应看看有没有活性。没活性了从新制备或者购买2.你的抗体亲有问题和力太高，或者抗原有问题与你这个抗体的结合太强，总之就是ab和ova衍生物抗原的结合太强，你的标准品量不足以竞争，所以没反应。如果是这个原因的话，建议：1.先增加大量的标准品验证下是不是真的没竞争，还是竞争太弱。2.假设你抗体没问题，换其他的合成抗原,试试不同载体，不同投料比，不同合成方法的抗原，做下竞争性。3.假设你抗原没问题，从新制备抗体吧。按不同载体，不同投料比，不同合成方法做成的抗原，拿来做免疫原，都打小鼠试试。4.抗原和抗体都有问题，最简单的方法，去买市面上比较好的原料做对照，按对照配对的模式做吧，以对照为模仿标准，你2个原料至少有一个是没问题的，做好一个在重新做另外一个。小分子筛到一个好的抗原抗体配对是要看运气的，多免疫几轮小鼠，多试试不同抗原和抗体的配对，希望你能成功。

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百智生物

用户

你怎么测定的血清效价？血清是多抗如何判定未与包被的小分子偶联载体反应呢

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橙枫

用户

做的不是鼠单抗吗？取腹水做下初纯试试

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