实验材料蛋白溶液或块状细胞蛋白试剂、试剂盒丙烯酰胺过硫酸铵电泳缓冲液5X样品缓冲液分离胶缓冲液浓缩胶缓冲液仪器、耗材微量注射器移液器吸头或凝胶上样吸头实验步骤1.安装凝胶灌制模具、灌制凝胶、开始电泳,以及对凝胶进行的操作、保存、染色等步骤均与方案 1 中所述一致。2.若要通过检测生物学活性来确定蛋白位置,则进行两组相同样品的电泳。一组染色,另一组检测活性。最常遇到的情况是检查胶中的酶促活性位置,即用相应的底物溶液清洗凝胶,在有酶促活性位置就会有有色产物出现。此外也可用 CBR-250 染色法使蛋白显色,见方案 2 或方案 3。......阅读全文
非损伤微测系统能为植物营养研究
7月4日,美国扬格/旭月北京非损伤微测系统,顺利中标西南大学资源环境学院。此次采购单位——西南大学资环院主要用户群的研究方向,即为植物营养。NMT作为通过离子、分子流速检测,揭示活体生物与外界环境进行信息交换的工具,它到底能为植物营养研究带来哪些新的成果与机遇呢?1、提升肥效/筛选氮磷钾高效作物农业
核酶实验——发夹型核酶实验
实验方法原理作为有催化活性的 RNA,发夹型核酶在生物体内的作用是位点特异的核酸酶以及 RNA 连接酶。发夹型核酶的催化基序最先是在烟草环斑病毒负链的卫星 RNA 中发现的,它表现一种可逆的自切割反应,最终使滚环复制的产物形成成熟的病毒核酸。发夹型核酶与锤头型核酶都能催化产物的连接,但是发夹型核酶的
RNA干扰(RNAi)实验原理与方法(3)
3.DEAE-葡聚糖和polybrene带正电的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚体复合物和带负电的DNA分子使得DNA可以结合在细胞表面。通过使用DMSO或甘油获得的渗透休克将DNA复合体导入。两种试剂都已成功用于转染。DEAE-葡聚糖仅限于瞬时转染。4.机械法转染技术也包括使用机械的方法,
siRNA的转染
将制备好的siRNA,siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种: 1.磷酸钙共沉淀 将氯化钙,RNA(或DNA )和磷酸缓冲液混合,沉淀形成包含DNA 且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA 复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。沉淀物的大小和质量对于磷酸钙转
RNA干扰实验技术
实验概要本文介绍了RNA干扰的原理及基本实验方法,包括了siRNA的设计、siRNA的制备和siRNA的转染等方法,及RNA干扰实验中的注意事项。实验原理近年来的研究表明,将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因
中国科学技术大学发表10篇CNS,全球学术排名表现出色
Science:中国科学技术大学在量子力学再取新突破 实现对量子系统的调控是人类认识并利用微观世界规律的必然诉求,也是诸多前沿科学领域的核心要素。自旋作为一种重要的量子调控研究体系,在世界各国的量子计划中均被列为重点研究对象。开展单自旋量子调控研究有助于人们在更深层次上认识量子物理的基础科学问题,
蛋白激酶C异构体分析实验
实验方法原理 实验材料 有 PKC 活性的酶样品试剂、试剂盒 [γ-32P] ATP 溶液PKC 反应缓冲液TCASDS - PAGE 样品缓冲液仪器、耗材 30℃ 水浴P81 磷酸纤维素膜离心管实验步骤 1. 每个分析反应按以下比例将各反应组分加入 1.5 ml 微量离心管中:4 μl 5 × P
siRNA实验成功的十个要点
1. 对每个基因设计并检测两到四个siRNA 序列为了找到潜在靶位点,扫描靶基因中的AA序列。记录每个AA 3’端19个核苷酸作为潜在siRNA 靶位点。潜在靶位点需通过GENBANK数据库的BLAST分析,去除那些与其它基因明显同源的靶位点。如果可能,siRNA 应根据mRNA 低二级结构
RNAi实验原理与方法(二)
3.用RNase III 消化长片断双链RNA制备siRNA其他制备siRNA的方法的缺陷是需要设计和检验多个siRNA序列以便找到一个有效的siRNA。而用这种方法——制备一份混合有各种siRNAs “混合鸡尾酒” 就可以避免这个缺陷。选择通常是200—1000碱基的靶mRNA模版,用体外转录
siRNA的转染方法
将制备好的siRNA,siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞 中的方法主要有以下几种:1.磷酸钙共沉淀将氯化钙,RNA(或DNA )和磷酸缓冲液混合,沉淀形成包含DNA 且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA 复合物粘附到细胞 膜并通过胞饮进入目的细胞 的细胞 质。沉淀物的大小和质量对
RNAi实验原理与制备方法(二)
3.用RNase III 消化长片断双链RNA制备siRNA其他制备siRNA的方法的缺陷是需要设计和检验多个siRNA序列以便找到一个有效的siRNA。而用这种方法——制备一份混合有各种siRNAs “混合鸡尾酒” 就可以避免这个缺陷。选择通常是200—1000碱基的靶mRNA模版,用体外转录
RNA干扰的详细实验步骤
步骤包括:(一)siRNA的设计1. 在设计RNAi实验时,可以先在以下网站进行目标序列的筛选:GenesilAmbion2. RNAi目标序列的选取原则:(1)从转录本(mRNA)的AUG起始密码开始,寻找“AA”二连序列,并记下其3 端的19个碱基序列,作为潜在的siRNA靶位点。有研究
使用胶做western blot的方法
在经典的Western Blot的世界里,蛋白电泳—转膜—封闭—抗体—显色这个五步骤环环相扣,构成WB完整过程,就象砌积木一样,少了前面一步的基础后面的就砌不上去。但是亲爱的朋友,告诉我,你们在一次又一次重复这个貌似简单又颇为费时的实验时,有没有设想过能省略掉其中的某个费时的非必需步骤,更直接更快得
静电离子色谱分离方法
提要 采用静电离子色谱法(EIC), 在ODS载体上涂覆胆汁酸诱导体胶束(CHAPS)进行阴离子和阳离子的同时分离. 以示差析光检测器检测, 分别以纯水、 碳酸盐、 磷酸盐和十二烷基磺酸盐电解质溶液为流动相, 探讨Na2SO4和NaBr, Na2S2O3, NaF和NaNO3, NaNO
银染法组织端粒酶活性TRAP电泳分析试剂盒产品使用说明
主要用途YIJI银染法组织端粒酶活性TRAP电泳分析试剂是一种旨在通过端粒酶体外合成端粒重复序列的引物延展方法,继而进行多聚酶联扩增反应,在非变性聚丙烯酰胺电泳上,通过经典的银染技术,呈现六碱基相间的阶梯图像,以分析和评价活细胞端粒酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。广
Isotype胞内染色有哪些学问?来看看这篇文章怎么说
对科研党来说,流式细胞术一点都不陌生,它以自己特有的方式从细胞蛋白水平定量检测目标蛋白的表达,并且能get到目标蛋白在各个细胞亚群中的表达,同时在细胞功能上也有很重要的作用,包括细胞凋亡,细胞周期,细胞增殖等等。 流式细胞术以细胞为研究对象,在流式细胞仪的作用下定量检测样品细胞的物理化学特征,
Western Blot全自动分析仪与传统WB方法的比较
Western Blot全自动分析仪与传统WB方法的比较,传统Western blot方法是利用抗原抗体的免疫反应,先将蛋白通过SDS-PAGE电泳分离开来,然后再利用电场力的作用将胶上的蛋白转移到固相载体(硝酸纤维素膜即NC膜)上,然后再加抗体形成抗原抗体复合物,利用发光或显色原理将结果显示到
Western Blot全自动分析仪与传统WB方法的比较
Western Blot全自动分析仪与传统WB方法的比较,传统Western blot方法是利用抗原抗体的免疫反应,先将蛋白通过SDS-PAGE电泳分离开来,然后再利用电场力的作用将胶上的蛋白转移到固相载体(硝酸纤维素膜即NC膜)上,然后再加抗体形成抗原抗体复合物,利用发光或显色原理将结果显示到膜或
PX系列天平静电消除指南
第一课 静电消除篇秋天到了,天气越来越干燥实验室里做称量实验自己先成了导电体手和金属勺子上都带静电影响称量精准度别怕,PX系列电子天平的独家专利ESR红色接地静电消除条让你一个动作3秒消除人体静电和金属静电快来看看到底是怎么回事儿吧分步讲解https:
蛋白质检测概述
蛋白提取蛋白样品提取是蛋白定量和分析的基础。天然蛋白质分子结构、化学性能各异,选择适当的细胞裂解液制备蛋白样品至关重要。选择细胞裂解液时,除了要考虑蛋白产量,还要考虑所选择的一抗的是否能识别线性的抗原表位。一些含有十二烷基硫酸钠(SDS)和强离子去污剂(如脱氧胆酸钠等)的蛋白质裂解液能够从组织或细胞
蛋白质检测简介
蛋白样品提取是蛋白定量和分析的基础。天然蛋白质分子结构、化学性能各异,选择适当的细胞裂解液制备蛋白样品至关重要。选择细胞裂解液时,除了要考虑蛋白产量,还要考虑所选择的一抗的是否能识别线性的抗原表位。一些含有十二烷基硫酸钠(SDS)和强离子去污剂(如脱氧胆酸钠等)的蛋白质裂解液能够从组织或细胞中提
蛋白质检测概述
蛋白提取蛋白样品提取是蛋白定量和分析的基础。天然蛋白质分子结构、化学性能各异,选择适当的细胞裂解液制备蛋白样品至关重要。选择细胞裂解液时,除了要考虑蛋白产量,还要考虑所选择的一抗的是否能识别线性的抗原表位。一些含有十二烷基硫酸钠(SDS)和强离子去污剂(如脱氧胆酸钠等)的蛋白质裂解液能够从组织或细胞
大连化物所水溶液中离子团簇化合作研究取得重要成果
近日,中科院大连化学物理研究所庄巍研究组与美国莱斯大学郑俊荣教授(大连化物所高级伙伴研究员)合作,在水溶液中离子团簇化研究中取得新进展。 尽管科学界为解开水中的离子水合作用结构做出了长期的努力,但是许多未知问题依然存在,特别是在1:1强电解质水溶液的离子团簇的存在和结构。过渡金属盐类溶解于水,
凝胶成像仪的“四大应用”
凝胶成像仪系统是实验室常用的一种仪器,其应用范围极其广泛。总的来说,凝胶成像系统可以用于:蛋白质、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分离纯化结果作定性分析;确定生物分子的分子量;用于生物分子的定量分析。 凝胶成像仪的“四大应用”解读: 1.分子量定量 对于
酶法检测磷酸化实验
实验方法原理实验材料含 100~200 μg 总蛋白的样品试剂、试剂盒 50 mmol L NN -2-羟丙磺酸哌嗉(PIPES)Sephadex G-25 柱(可选)PIPES 2-ME 或 RPERS DTT 缓冲液马铃薯酸性磷酸酶2 × SDS-PAGE 样品缓
iPrep™ GeneCatcher™ gDNA Blood Kit
实验概要The iPrep™ GeneCatcher™ gDNA Blood Kit allows rapid and automated extraction of genomic DNA (gDNA) from human blood including archived
放射性同位素标记的DNA序列测定分析
实验方法原理 使用一种单链的DNA 模板或经变性的双链DNA 模板和一种恰当的DNA 合成引物。DNA 聚合酶利用单链的DNA 模板,合成出准确互补链,在合成时,某种dNTP换成
如何确定适用于某种特定抗体的抗原修复方法?
有些抗体对抗原修复方式有特别要求的,一般在其说明书中都会有明确的标注和推荐。但是很多抗体并没有一个特别的推荐,就需要实验者自己来进行优化和摸索了。可以参考51AB网站实验方法中“免疫组化实验方法”以及abcam网站的的IHC protocols page查看更多的抗原修复方法