实验方法原理 实验材料 转瓶或单层培养的哺乳动物细胞(如HeLa细胞)试剂、试剂盒 PBS低渗缓冲液高盐缓冲液含1. 2 mol L KCl透析缓冲液液氮仪器、耗材 贝克曼 JS4. 2 转子或相当的转子50 mL 圆锥形刻度聚丙烯离心管(对较小体积的提取物也可用 15 mL 的离心管)Dounce 氏玻璃匀浆器(B 型研杵)Beckman JA-20 离心转子或相当的转子磁性搅拌器或倾斜台 Beckman JA-20 离心转子或相当的转子磁性搅拌器或倾斜台、 管型透析膜(14000 MWCO)、电导计实验步骤 1a) 收集转瓶培养的细胞:将 5× 108〜10× 108 细胞置 1 L 的塑料瓶 1850 g 离心 20 min。轻轻倒去上清并丢弃,将细胞转入50 mL 锥形刻度离心管中(每管 2〜3 L 培养液中的细胞)。进行步骤 2。1b) 收集单层培养的细胞:单层细胞长满后去掉培养液。用足量 PBS 洗 1 ......阅读全文
从哺乳动物细胞中制备核和细胞质提取物
核提取物的制备核提取物制备优化细胞质(S-100)组分的制备实验方法原理实验材料转瓶或单层培养的哺乳动物细胞(如HeLa细胞) &n
核提取物的制备实验(一)
从培养细胞中分离的细胞核制备成的提取物在体外转录和mRNA加工中具有精确的功能,(1)纯化蛋白质(2)核提取物。实验方法原理通过向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后,可以降低蛋白质的溶解度,使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析,是物理变化,可复原。对于特定的蛋白质,影响蛋白质盐析的主要因素
从哺乳动物细胞中制备核和细胞质提取物—核提取物制备
实验材料转瓶或单层培养的哺乳动物细胞(如HeLa细胞)试剂、试剂盒PBS低渗缓冲液高盐缓冲液含1. 2 mol L KCl透析缓冲液液氮仪器、耗材贝克曼 JS4. 2 转子或相当的转子50 mL 圆锥形刻度聚丙烯离心管(对较小体积的提取物也可用 15 mL 的离心管)Dounce 氏玻璃匀浆器(B
核提取物的制备实验
实验方法原理 通过向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后,可以降低蛋白质的溶解度,使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析,是物理变化,可复原。对于特定的蛋白质,影响蛋白质盐析的
核提取物的制备实验
实验材料哺乳动物试剂、试剂盒PBS低渗缓冲液低盐缓冲液透析缓冲液仪器、耗材转子离心机电导计透析膜匀浆机离心管实验步骤 1a. 收集转瓶培养的细胞:将浓度为5~10×108细胞/l 的培养液用1 L 的塑料瓶1 850 g 离心20 min,将细胞收入5