什么是抗体?
抗体(antibody, Ab)是B细胞接受抗原刺激后增殖分化为浆细胞所产生的糖蛋白,主要存在于脊椎动物的血液和B淋巴细胞膜表面,通过与相应抗原特异性结合,发挥体液免疫的功能。结构呈“Y”字型;
球状蛋白质;
普通的抗体:4条多肽链-两条重链(H链(γ、α、μ、δ和ε五种))两条轻链(L链κ和λ两种);
普通的抗体:8个结构域
可变区和恒定区
二硫键和共价键链接
根据重链不同:IgG、IgM、IgE、IgA、IgD 五个类别
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Y型结构 球状蛋白 | 两条轻链(H链)+两条轻链(L链)8个结构域 |
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可变区 恒定区 | Fab (Fab’)2 :可变区 Fc段:恒定区 |
*知识小分享:非普通免疫球蛋白指的是驼类抗体和软骨鱼类抗体,这两类抗体均没有轻链,各由2条重链组成,因此又被称作“重链抗体”(heavy-chain antibody);鲨鱼的抗体多了三对重链结构域。
一抗:就是平时所说的抗体。能和非抗体性抗原(特异性抗原)特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。
二抗:能和抗体结合,即抗体的抗体,其主要作用是检测抗体的存在,放大一抗的信号。
如何正确选择二抗?
二抗的来源-种属来源
二抗的Fc段属于恒定区,每个种属的Fc段都相同。因此二抗的选择首先取决于一抗的物种来源,一抗来源于哪种物种,二抗就选择抗此物种;比如,一抗是小鼠源,二抗就选择抗小鼠;一抗是兔源,二抗就选择抗兔。
三种形式的选择
1)Whole IgG
2) F(ab’)2 fragment
3) F(ab) fragment
二抗的特异性:不同来源的免疫球蛋白含有相似的结构,抗体的生产过程也相似。抗一个物种的抗体可能与其他物种发生交叉反应,这种情况会事先做特殊处理,抗体会有标记“min X Bov, Hu, Ms, Rb, Rat SrProt……”
Anti-lgG(H+L) | 整个抗体分子,可与抗体的任何部位结合 |
Anti-IgG,Fc fragment specific | 与 IgG重链的Fc部分结合;这类抗体需要额外检测和处理来降低和IgM和IgA的交叉反应,如“Anti-IgG,Fc Y fragment specific” |
Anti-lgG,F(ab)2 frangmentspecific | 与 IgG的F(ab)2/Fab部分结合 |
Anti-lgG,Fcy subclass specific | 与不同的小鼠亚型 |
二抗的耦联标记
常用的标记物:酶、荧光素和生物素。
实验类型 | 标记物选择 |
Western blot /ELISA | 酶 |
免疫组化 | 辣根过氧化酶(HRP)/碱性磷酸酶(AP) |
细胞(流式FC)或组织实验 | 荧光基团 |
得到更大的检测信号 | 生物素(biotin)/抗生素蛋白 |
蚂蚁淘品牌推荐:Jackson二抗
1、种属丰富
种属丰富 | |||
Alpaca(羊驼) | Bovine(牛) | Cat(猫) | Chicken(鸡) |
Dog(狗) | Goat(山羊) | Guinea Pig(天竺鼠) | Syrian Hamster(叙利亚仓鼠) |
Horse(马) | Human(人) | Mouse(小鼠)
| Armenian Hamster(亚美尼亚仓鼠) |
2、标记物多
实验 | ||
Unconjugated | 不带标记 | |
Horseradish Peroxidase | 辣根过氧化酶 | WB ,ELISA,IHC ,ICC |
Alkaline Phosphatase | 碱性磷酸酶 | |
Biotin-SP | 生物素 | |
DyLight™405A=400, E=421 | 荧光 | FC(流式),IF |
CoumarinAMCAA=350, E=450 | ||
Alexa Fluor®488A=493, E=519 | ||
Fluorescein(FITC)A=492, E=520 | ||
CyanineCy™3A=550, E=570 | ||
Rhodamine(TRITC)A=550, E=570 | ||
RhodamineRed™-X (RRX)A=570, E=590 | ||
Alexa Fluor®594A=591, E=614 | ||
Alexa Fluor®647A=651, E=667 |
3、Jackson二抗的主要形式
1)Whole IgG
2) F(ab’)2 fragment
3) F(ab) fragment
抗体形式 | 特点及应用 |
Whole IgG Affinity-Purified Antibodies | 完整的分子,适用于大部分实验,性价比最高 |
F(ab')₂ Fragment Affinity-Purified Antibodies | 降低二抗中Fc端的非特异性结合,避免抗体与Protain A或者G结合 |
Fab Fragment AffinityPurified Antibodies | 只有一个结合位点,用来封闭内源性的免疫球蛋白;相同物种来源的一抗中做多标记 |
Anti-Mouse IgG Subclass Specific Antibodies
| 区分不同的小鼠IgG亚型 |
FabuLight™ - Affinity-Purified Fc Specific Fab Fragments | |
AntiLight Chain-Specific Antibodies for Western Blotting after IP | IP免疫沉淀实验 |
Fluorescent Protein Conjugates (R-PE, APC, and PerCP) | |
Anti-Fluorescein, Anti-Digoxin, Anti-Biotin, and Anti-HRP | 蛋白量少,放大实验体系 |
热点:
骆驼类抗体是研究热点之一,如羊驼抗体。主要原因是骆驼抗体缺少轻链,羊驼外周血液中存在只包含一个重链可变区(VHH)和两个常规的CH2与CH3区的抗体,称为纳米抗体。相对于人工改造的基因工程单链抗体片段-scFv抗体,该抗体更稳定不容易聚集。如果只克隆其可变区(VHH),其分子量只有15KD,是很多抗体药物研发的首选。
纳米抗体的有点:
1)纳米抗体结构简单,分子量小,更利于表达和使用;
2)更方便再大肠杆菌和各种真核系统中高效大量表达;
3)由于其只有一个结合位点,属于单域抗体,作为诊断试剂由更好的通透性、特异性和检测线性;
4)便于与各种融合蛋白偶联或者更容易被各种标记物标记;
5)更易于制备双功能抗体,更利于靶向药物开发和细胞靶点定向运输。
6)作为药物开发,其对于人免疫原性小,不容易产生免疫排斥