Nanodrop One与Qubit 4的区别
问：我测浓度的时候用的是Nanodrop，两个样品均达到了贵公司的样品要求，可是您测了之后尤其是实验组浓度太低了！我看了你们的方法，估计你们的方法测出来要准确一些吧！
答：老师的检测方法为Nanodrop分光光度计检测DNA的浓度和总量：该检测方法原理为核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键系统，能吸收紫外光，RNA和DNA的紫外吸收峰在260nm波长处。一般在260nm波长下，每1ml含1µgRNA溶液的光吸收值为0.022~0.024，每1ml含1µgDNA溶液的光吸收值约为0.020，故测定未知浓度RNA或DNA溶液在260nm的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。此法操作简便，迅速。若样品内混杂有大量的核苷酸或蛋白质等能吸收紫外光的物质，则测光误差较大，故应设法事先除去。NanoDrop及其它紫外分光光度计均采用紫外吸光度进行检测，它无法区分出DNA、RNA、降解核酸、游离核苷酸及其它杂质。尽管紫外吸收定量法是最常用的一种DNA或RNA定量方法，但其读数并不可靠且不准确，不能用于后续建库的参考；
而我们对DNA浓度的检测以及定量方法为qubit荧光计检测的：Qubit荧光计是新一代核酸和蛋白定量仪，实验台上可以对DNA和RNA进行精准定量，它可以采用荧光染料检测特定目标分子的浓度。它采用专门研制的荧光检测技术，该技术采用只有与DNA、RNA或蛋白质结合后才发出荧光的Molecularprobes®染料。这些荧光染料只有与特异性的靶分子结合时，才能发出荧光信号，即使有游离核苷酸或降解核酸存在时亦是如此。由于Qubit®技术只检测靶分子(而不是污染物)的浓度，因此这种特异性可以获得十分精确的结果，这对我们后续的精确建库过程是很必要的；
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发布于 ： 2018-03-12
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