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的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物。
完整的ELISA试剂盒包含以下各组分:
(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);
(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);
(3)酶的底物;
(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定
中);
(5)结合物及标本的稀释液;
(6)洗涤液;
(7)酶反应终止液。
如果用双抗体夹心法,第二个抗体可以用多抗,这样保证你的抗原会被结合,多抗可以直接带HRP标记或者可以用HRP标记二抗去和多抗结合。
1. 直接法测定抗原 2.间接法测定抗体 3.双抗体夹心法测定抗原4. 竞争法测定抗原 厚百生物专业提供各类生化实验试剂、仪器、耗材,提供技术服务,满足您的实验室常规采购需求。厚百,让您更省心!
大家好,我在做双抗夹心法的elisa实验,已经花了20来天了,然而标准曲线的线性一直做不好,而且不稳定。下面我把具体的实验过程说下,希望大家能给我提个建议,谢谢!
首先我从以下数据中确定了标准品的起始稀释浓度:4.64,46.4,464,4640IU/ml对应的OD为0.55,1.178,1.086,1.168.因此我取46.4IU/ml(300ng/ml)作为标品的起始稀释浓度。然后作了关于单抗,多抗,二抗的合适稀释度的实验,我的数据如下:
123456789
空白0.2290.1920.2120.1540.1390.1730.2360.1770.257
46.4iu/ml1.2421.5271.2691.9641.6281.9592.0051.8802.163
9.28iu/ml0.9680.9501.0131.1360.8731.2461.6971.5861.769
阴性0.1920.1760.2500.1310.1610.1540.1990.2190.244
选取了7号组合单抗,多抗,二抗分别为1ug/ml,1ug/ml,0.5ug/ml。
标品按照以下梯度稀释:46.423.211.65.82.91.450.725iu/ml.以下是我近来做的三组数据,都是相对空白的相对值:
123
46.4iu/ml0.6130.5860.851
23.20.5240.6490.765
11.60.3820.510.663
5.80.3160.3850.567
2.90.2880.3190.37
1.450.2890.1340.303
0.7250.1210.1460.113
空白0.0820.0870.101
阴性0.0820.1050.101
似乎梯度都不明显。我现在疑惑的是我的标品浓度的设置有问题还是之前抗体的浓度选择不合适,请大家多指点,万分感谢!!!
(一)双抗体夹心法
(二)间接法
(三)竞争法
(四)双位点一步法
(五)捕获法测IgM抗体
(六)应用亲和素和生物素的ELISA
现在国内最差也是用3代试剂,有些地方会用4代试剂。
4代试剂(检查抗原+抗体)——窗口期为4周。因为抗原于3-4周达到复制的峰值,此时通过4代试剂检查,如果感染了HIV,抗原/抗体至少有一个为阳性,如果都是阴就排除了。
3代试剂(只查抗体)——窗口期为6周。
以上为理论分析+临床经验的结果,可以说是99.9%的准确度。
但是目前FDA、CDC和试剂生产商统一达成的共识,也就是针对普通人,最保守的窗口期是3个月。无论什么试剂,3个月都100%排除。