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蚂蚁淘讲解:人白介素ELISA试剂盒详解
来自 : 蚂蚁淘

英文名称:HumanInterleukinELISAKit,规格96T/48T两种规格,本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素水平。用纯化的人白介素抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白介素,再与HRP标记的白介素抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

  • 规格

  • 96T/48T

  • 特点

  • 应用双抗体夹心法测定

目录
  1. 1简介

  2. 2试剂盒组成

  3. 3样本处理及要求

  4. 4操作步骤

  1. 5试剂盒注意事项

  2. 6计算

  3. 7保存条件及有效期

  1. 8人白介素-1

  2. 9人白介素-2

  3. 10人IL-2sRa

  4. 11人白介素系列

人白介素ELISA试剂盒简介

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人白介素含量。

ELISA试剂盒图片ELISA试剂盒图片

人白介素ELISA试剂盒试剂盒组成

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1份

1份


  

封板膜

2片(48)

2片(96)


  

密封袋

1个

1个


  

酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

标准品:270ng/L

0.5ml×1瓶

0.5ml×1瓶

2-8℃保存

标准品稀释液

1.5ml×1瓶

1.5ml×1瓶

2-8℃保存

酶标试剂

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

样品稀释液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂A液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂B液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

终止液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

浓缩洗涤液

(20ml×20倍)×1瓶

(20ml×30倍)×1瓶

2-8℃保存

人白介素ELISA试剂盒样本处理及要求

1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3.尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

6.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.

7.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

人白介素ELISA试剂盒操作步骤

1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180ng/L,120ng/L,60ng/L,30ng/L,15ng/L)。

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置38℃温育30分钟。

4.配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.温育:操作同3。

8.洗涤:操作同5。

9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

人白介素ELISA试剂盒试剂盒注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

人白介素ELISA试剂盒计算

以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

试剂盒性能:

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。

2.批内与批见应分别小于9%和11%

人白介素ELISA试剂盒保存条件及有效期

1.试剂盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6个月

人白介素ELISA试剂盒人白介素-1

特异性:HuIL-1a,检测范围:3.9pg/ml~250pg/ml,灵敏度:2pg/ml,标本用量:100ul/well。本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法的原理制备,适用于体外定量检测人血清、血浆、组织、体液或细胞培养上清液中的天然和重组的IL-1a浓度。白介素-1(IL-1)是IL-1α和IL-1β两种蛋白的统称,是由不同基因编码的,但它们识别细胞表面相同的受体。IL-1α和IL-1β结构相似,在氨基酸水平上有25%的同源性;两种都是由分子量31kDa前体裂解成17.5kDa的蛋白质。IL-1α和IL-1β都不包含典型的疏水信号肽,但是有证据证明一些非典型路径可以分泌这些因子。大量的IL-1α以前体形式保留在胞内。一部分未修饰的IL-1α运输到细胞表面但仍与细胞相连。未修饰的膜结合IL-1α体现生物活性,邻近的细胞旁分泌IL-1。IL-1α和IL-1β与特定的受体结合后发挥其作用。

人白介素ELISA试剂盒人白介素-2

特异性:HumanIL-2,检测范围:7.8pg/ml~500pg/ml,高灵敏度:4pg/ml,高特异性:不与IL-1,3,4,5,6,8,10,12,IFN,TNF,VEGF,TGF及ICAM等反应,高重复性:板内、板间变异系数均

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发布于 : 2021-07-15 阅读(210)
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