请使用支持JavaScript的浏览器! 【求助】夹心法ELISA标准曲线是否应该与试剂盒里提供的一致?_蚂蚁淘商城
【求助】夹心法ELISA标准曲线是否应该与试剂盒里提供的一致?
2021-08-15
问题描述:

我做的是血清中IKZF3测定,由于没有现成的试剂盒,自己从国内的CUSBIO定制的,分批订货。。前两次的标准曲线形状和公司提供的基本近似。但这一次却差太远。我做出来的近似线性,而公司提供的还是和原来的......

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66180
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1。我做出这样的标准曲线,原因是什么?答:此问题无法回答。2。标准曲线是否应该以公司提供的为准?如果与公司提供的不一致,是否说明我的实验操作有问题?答:标准曲线不能以公司提供的为准。实际标准曲线与公司提供的不一致是普遍存在的;而实际标准曲线与公司提供的完全一致基本上为巧合。标准曲线的不同不能说明你的实验操作有问题。但是,你的实验操作要是与公司的实验操作不一样,得到的实际标准曲线与公司的标准曲线应该是不一样的。3。我做的标准品检测,最大浓度的OD值与公司提供的标曲差距为何那么大,是显色时间不同吗?我控制的显色时间为15分钟,而说明书要求是10-30分钟。答:夹心法ELISA反应实际上是两种方法。其一,就是常用的夹心法ELISA反应,这是一个双抗夹心反应,由于多加了一层抗体,提高了特异性检测的灵敏度;其二,是改良双抗夹心法,是在双抗夹心反应的基础上中间又多加了酶标抗抗体,使其灵敏度和重复性均比双抗夹心ELISA好。定量检测最讲求实验体系的完整性。这种完整性不仅仅体现在试剂的稳定性上,还贯穿于整个实验过程中使用的各种仪器和工具甚至流程与人。由于您使用的仪器与公司使用的仪器并非同一台,操作过程中加样量的精准性、孵育时间、避光过程的拿捏、洗涤手法、显色时间以及终止液加入时机也与公司不同,因此,您所测量得的OD值必定不与公司测量的OD值完全相同,因而,未经核实就直接采用公司的标准曲线是不妥当的。由于各种因素的影响具有多种不确定性,建议夹心法ELISA定量检测每批均应做标准曲线及质控,其质控点最好能包含空白值、临床异常低值、诊断阈值、临床正常参考中值和临床异常高值5个点;最低质控点要求最少应包含空白值和诊断阈值。显然,这样的做法耗时、耗财,还望memesasa再三斟酌。最后我送您一句话--------“科研和临床应用的不同点在于:科研可以9999次失败只要1次成功;临床应用只能9999次重复成功只有1次随机失误。”共勉吧!
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memesasa
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展开引用66180标准曲线不能以公司提供的为准。。。定量检测最讲求实验体系的完整性。。。建议夹心法ELISA定量检测每批均应做标准曲线及质控,其质控点最好能包含空白值、临床异常低值、诊断阈值、临床正常参考中值和临床异常高值5个点;最低质控点要求最少应包含空白值和诊断阈值。。。“科研和临床应用的不同点在于:科研可以9999次失败只要1次成功;临床应用只能9999次重复成功只有1次随机失误。”......十分感谢您的热心回答。我清楚了
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jingqiu1989
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我最近做的标准曲线跟你的很像。用的是tablecurve,但是过期了,你是用什么做的?能给我传一份吗?非常感谢!!
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