双抗夹心法ELISA标准曲线的问题
大家好,我在做双抗夹心法的elisa实验,已经花了20来天了，然而标准曲线的线性一直做不好，而且不稳定。下面我把具体的实验过程说下，希望大家能给我提个建议，谢谢！
首先我从以下数据中确定了标准品的起始稀释浓度:4.64,46.4,464,4640IU/ml对应的OD为0.55,1.178,1.086,1.168.因此我取46.4IU/ml(300ng/ml)作为标品的起始稀释浓度。然后作了关于单抗，多抗，二抗的合适稀释度的实验，我的数据如下：
123456789
空白0.2290.1920.2120.1540.1390.1730.2360.1770.257
46.4iu/ml1.2421.5271.2691.9641.6281.9592.0051.8802.163
9.28iu/ml0.9680.9501.0131.1360.8731.2461.6971.5861.769
阴性0.1920.1760.2500.1310.1610.1540.1990.2190.244
选取了7号组合单抗，多抗，二抗分别为1ug/ml,1ug/ml,0.5ug/ml。
标品按照以下梯度稀释：46.423.211.65.82.91.450.725iu/ml.以下是我近来做的三组数据,都是相对空白的相对值：
123
46.4iu/ml0.6130.5860.851
23.20.5240.6490.765
11.60.3820.510.663
5.80.3160.3850.567
2.90.2880.3190.37
1.450.2890.1340.303
0.7250.1210.1460.113
空白0.0820.0870.101
阴性0.0820.1050.101
似乎梯度都不明显。我现在疑惑的是我的标品浓度的设置有问题还是之前抗体的浓度选择不合适，请大家多指点，万分感谢！！！
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