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【求助】如此夹心法ELISA可行吗?
2021-08-24
问题描述:

手头有P蛋白的鼠单抗和兔多抗,现在想检测培养的肿瘤细胞中P蛋白的含量,用竞争法太浪费抗原了,想用下面的方法(类似夹心法):
包被单抗(过量)——抗原37度1小时——多抗37度1小时——二抗——显色

按道理应该可行,但有一个问题:兔二抗对鼠一抗也会反应吗?

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风雨の人生
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用夹心法你的问题就太多了!你至少需要考虑以下几个问题1:你的配对抗体是否真的能够配对,是不是针对抗原的不同位点,假如就是不同位点,那位点间的空间是否能 满足配对的需要!2:你的二抗来个抗兔的,你是否考虑其可能与鼠有交叉反应,3:你的标准抗原从哪来,你没有标准抗原做标准曲线你还做ELISA干吗?GOOD LUCK!
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zoujie8171
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兔二抗还真是很容易与鼠源抗体有一定程度的交叉反应,你考虑的对.建议最好不要这样做,当然也可以试试.
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xsp0715
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我也是用这种方法来检测的去年用了鼠多抗,有明显的交叉反应,刚刚制备了鼠单抗,预备实验表明鼠单抗与纯化的兔多抗交叉反应很小。
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