Ceruloplasminisanabundantα2-serumglycoproteinthatcontains95%ofthecopperfoundintheplasmaofvertebratespecies.Ceruloplasminisacopper-bindingproteinthatnormallyremovesironfromcellsbyitsferroxidaseactivity.Ceruloplasminconcentrationonaverageis14.6(±4.0)mg/dL.Lowlevelsofceruloplasminleadtotheabnormaldepositionofironincells,includingthoseofthepancreas,liver,retinaandthebasalgangliaregionofthebrain.SomediseasesassociatedwithceruloplasminareWilson’sdisease.Hemochromatosis,MenkesdiseaseandAceroluplasminemia.
Species:human
SampleType: serumandplasma(suggesteddilution)
SampleSize:25uL
StandardCurveRange: 0-40ug/mL
Sensitivity: 0.06ug/mL
AssayLength: 2hours40min
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下图为ELISA原理图,夹心法即Sandwich ELISA,竞争法就是Competitive ELISA
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1. 直接法测定抗原 2.间接法测定抗体 3.双抗体夹心法测定抗原4. 竞争法测定抗原 厚百生物专业提供各类生化实验试剂、仪器、耗材,提供技术服务,满足您的实验室常规采购需求。厚百,让您更省心!
请大家帮帮忙,第一步加完抗原后必须封闭吗
目前,我用该蛋白的鼠源性单抗来包被ELISA板子,5%BSA37度封闭二小时后,洗涤四次后将板子分三个组加入抗原:其中一个组中加入的是我重组的蛋白,另一个组为用其它方法证实含该蛋白的人体内血清,最后一个组加入PBS。37度一小时后洗涤四次后每孔加入我制备的兔源性多抗。37度一小时洗涤六次后我再加入酶标记的抗兔的抗体37度40分钟后洗涤六次后TMB显色。
问题就在我显色后所有的孔都是阳性,其中以抗原为我的重组蛋白组与PBS组OD值最高,两组都可以达到1.8以上,而加入的抗原为人体血清组低,为0.6-1.0不等。
后面我优化条件,封闭液用过5%的脱脂奶粉,2%的BSA,包被的单抗浓度摸了梯度,加入的多抗也摸了梯度,酶标的抗体也摸了梯度。结果都没有改变,连趋势每次都是一样以重组蛋白组与PBS组OD最高。
今天我还试着把抗原换成其它蛋白也做出了强阳性?
请教各位高手,我的ELISA该如何往下面做了啊,是不是我的抗体本身有问题呢?
对了,我包被用的单抗是用GE公司的预装柱纯化的,很纯,在考染中是看不到一条杂带的。
(2)封闭:将已包被的板用洗涤液洗涤2次,每孔加入120 μL封闭液,封闭一段时间,取出,甩干备用。
(3)竞争反应:在制备好的板中每孔加入50 μL系列浓度的标准品溶液和50 μL稀释好的酶标抗体溶液,孵育一段时间。
(4)洗板:用洗涤液洗涤5次。
(5)显色反应:每孔加入显色溶液100 μL,孵育一段时间。
(6)终止:每孔各加入终止液,在酶标仪上测定各孔的吸光值。
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