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assaybiotechnology/CREB Colorimetric Cell-Based ELISA Kit/CB5169/1 Kit
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assaybiotechnology/CREB Colorimetric Cell-Based ELISA Kit/CB5169/1 Kit
品牌 / 
ABT
货号 / 
CB5169
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The product is for research use only, not for use in diagnostic or therapeutic procedures

Product Name CREB Colorimetric Cell-Based ELISA Kit
Assay Type Cell-Based
Sub Type None
Detection Method Colorimetric 450 nm
Synonyms cAMP responsive element binding protein 1; cAMP-response element binding protein; CREB-1; CREB1
Storage/Stability 4°C/6 Months
Dynamic Range > 5000 Cells
NCBI Gene Symbol CREB1
Database Links

Gene ID: 1385 UniProt ID: P16220

OMIM #: 123810 Unigene #: Hs.516646

AssayBiotechnology公司成立于2006年,位于美国洛杉矶。AssayBiotechnology公司有超过六千种抗体,涵盖了各种研究和应用领域。另外,AssayBiotechnology公司还拥有一千多种磷酸化抗体,同时公司正努力生产所有人类genowide抗体,针对到2015年为止出版过的调控磷酸化位点的抗体。作为可靠的高质量抗体生产商,AssayBiotechnology公司拥有多年研发经验的高级科学家确保了公司抗体的高品质,高特异性,100%的保证抗体质量。

AssayBiotechnology公司利用主要由混合抗原均一化技术和人类cDNA/EST噬菌体表面呈现文库技术两项具有自主知识产权的专有技术组成抗人类蛋白单克隆抗体大规模开发生产平台,完美地解决了传统的单克隆抗体生产耗时过长及成本过高的瓶颈。AssayBiotechnology公司可在较短的时间内将剩余的抗人类基因编码蛋白质单克隆抗体开发完,从而建立世界上第一个与人类基因库相配套的抗人类蛋白单克隆抗体库和抗原库(该抗体库和抗原库与国际上通用的GenBank相链接),并建成全球种类最多和规模最大的抗人类蛋白单克隆抗体生产体系和销售中心。

与人类基因相联系的抗体蛋白与抗原蛋白信息是有限的,并且每一个抗体与抗原蛋白相关信息都是唯一的和不可复制的,和人类基因组计划一样,谁先开发出来谁就拥有垄断优势。AssayBiotechnology公司开发出抗体库和抗原库之后,将对每一个新发现的和有价值的抗体与抗原信息申请专利保护,以后所有应用到这些抗体与抗原信息的需求者(例如药物靶点筛选)都必须向AssayBiotechnology公司购买使用许可,因而这是最新生命科学领域的战略高地。


自2006年1月成立以来,AssayBiotechnology一直是行业*的抗体生产和工程及分析技术,荧光染料,淬灭剂,重组蛋白合成肽的全球贡献者。我们位于加利福尼亚州旧金山湾区的中心地带,致力于满足全球对医疗和学术研究中使用的高质量检测试剂盒和免疫试剂的需求,这些试剂主要构成医疗保健的基础。详细产品列表:AssayBiotech全国代理 货号产品规格OK-01004-1BB-R(Human)OmniKine™ELISAKit12x8-WellMicrostripsOK-0101BD-1(Human)OmniKine™ELISAKit12x8-WellMicrostripsOK-0102BD-2(Human)OmniKine™ELISAKit12x8-WellMicrostripsOK-0103BD-3(Human)OmniKine™ELISAKit12x8-WellMicrostripsOK-0104BD-4(Human)OmniKine™ELISAKit12x8-WellMicrostripsOK-0105Betacellulin(Human)OmniKine™ELISAKit12x8-WellMicrostripsOK-0106beta-NGF(Human)OmniKine™ELISAKit12x8-WellMicrostripsOK-0107BMP-2(Human)OmniKine™ELISAKit12x8-WellMicrostripsOK-0108CNTF(Human)OmniKine™ELISAKit12x8-WellMicrostripsOK-0109CTGF(Human)OmniKine™ELISAKit12x8-WellMicrostripsOK-0110CXCL-16(Human)OmniKine™ELISAKit12x8-WellMicrostripsOK-0111EGF(Human)OmniKine™ELISAKit12x8-WellMicrostripsOK-0112EG-VEGF(Human)OmniKine™ELISAKit12x8-WellMicrostripsOK-0113Eotaxin(Human)OmniKine™ELISAKit12x8-WellMicrostripsOK-0114Eotaxin-3(Human)OmniKine™ELISAKit12x8-WellMicrostripsOK-0115FGF-Basic(Human)OmniKine™ELISAKit12x8-WellMicrostripsOK-0116Follistatin(Human)OmniKine™ELISAKit12x8-WellMicrostripsOK-0117G-CSF(Human)OmniKine™ELISAKit12x8-WellMicrostripsOK-0118GM-CSF(Human)OmniKine™ELISAKit12x8-WellMicrostripsOK-0119GRO/MGSA(Human)OmniKine™ELISAKit12x8-WellMicrostripsA000114-3-3zeta(Phospho-Ser58)Antibody50ulA0002ADD1(Phospho-Ser726)Antibody50ulA0003AMPKalpha1/2(Phospho-Thr183/172)Antibody50ulA0004AmyloidbetaA4(Phospho-Thr743/668)Antibody50ulA0005CaMK2alpha/beta/delta(Phospho-Thr305)Antibody50ulA0006CREB(Phospho-Ser142)Antibody50ulA0007DARPP-32(Phospho-Thr75)Antibody50ulA0008EGFR(Phospho-Thr678)Antibody50ulA0009EGFR(Phospho-Thr693)Antibody50ulA0010EFNB1/2(Phospho-Tyr330)Antibody50ulA0011GABA-RB(Phospho-Ser434)Antibody50ulA0012GSK3alpha/beta(Phospho-Tyr279/216)Antibody50ulA0013HSP90B(Phospho-Ser254)Antibody50ulA0014IkappaB-beta(Phospho-Ser23)Antibody50ulA0015IkappaB-epsilon(Phospho-Ser22)Antibody50ulA0016Keratin18(Phospho-Ser33)Antibody50ulA0017Keratin8(Phospho-Ser73)Antibody50ulA0018MAPKAPK2(Phospho-Thr334)Antibody50ulA0019MEF2A(Phospho-Ser408)Antibody50ulA0020Myc(Phospho-Ser62)Antibody50ul

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采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人TPO(Thrombopoietin)单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的TPO与单抗结合,加入生物素化的抗人TPO,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Strep 查看更多>
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采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人NeurokininA单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的NeurokininA与单抗结合,加入生物素化的抗人NeurokininA,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的S 查看更多>
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采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗兔IL-1b单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的IL-1b与单抗结合,加入生物素化的抗兔IL-1b,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生 查看更多>
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人MDC/CCL22单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的MDC与单抗结合,加入生物素化的抗人MDC,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生 查看更多>
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人IL-17A单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的IL-17A与单抗结合,加入生物素化的抗人IL-17A,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与 查看更多>
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人E3单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的E3与单抗结合,加入生物素化的抗人E3,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结 查看更多>
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人EGR-1单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的EGR-1与单抗结合,加入生物素化的抗人EGR-1,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生 查看更多>
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竞争法一般用于检测无法同时与两种抗体结合的小分子抗原,其原理为:将针对小分子抗原的抗体包被在酶标板上,检测时加入待测样本,使样本中的待测抗原与酶标板上的抗体结合。然后加入HRP酶标记的抗原,此抗原也可与酶标板上的抗体结合,由于酶标板上固著的抗体数量有限,因此当样本中抗原的量越多,则HRP酶标记抗原可结合的包被抗体就越少,两种抗原竞争结合包被抗体,所以称为竞争法。接着加入HRP酶的底物TMB,TMB被酶催化发生颜色反应,当样本中抗原量越多,代表酶标板孔内留下的HRP标记抗原越少,显色也就越浅。百特纯大分子Meretciel的测激素的ELISA试剂盒有些就是竞争法的。夹心法又叫双抗夹心法,用于检测较大分子的抗原或抗体,又分为:双抗体夹心法,用于检抗原;和双抗原夹心法用于检抗体。以双抗体夹心法为主,下面以双抗体夹心法为例讲解原理(双抗原夹心法类似):首先将具有专一性之抗体包被(coating)于酶标板上,检测时加入待测样本,样本中若含有待测抗原,则会与酶标板上包被的抗体专一性结合,然后加入另一种针对待检抗原的抗体,通常称为检测抗体,包被抗体和检测抗体将抗原夹在中间所以叫双抗夹心。检测抗体通常带有HRP酶标记,接着加入HRP酶的底物TMB,TMB被酶催化发生颜色反应,样本中抗原量越多则显色越深。现在很多ELISA试剂盒生产厂家比如:优尔生和百特纯大分子Meretciel将生物素-亲和素放大系统引入双抗夹心法,也就是在检测抗体上标记生物素,然后加入HRP酶标记的亲和素(或链亲和素),利用亲和素可以和生物素分子紧密结合的特性,将HRP酶连接到检抗上,接着加入底物显色。也有引入二抗的,如下图,检测抗体不标记,再加入HRP标记的二抗与检测抗体结合
下图为ELISA原理图,夹心法即Sandwich ELISA,竞争法就是Competitive ELISA
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双抗体夹心法
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
间接法
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜;
2.次日洗涤3次;
3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;
4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分钟,洗涤;
6.’最后一遍用DDW洗涤。
其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
有的原理上说是(1)单抗包被-抗原-酶标二抗-底物显色。但是我看论文上都是(2)单抗包被-抗原-二抗-酶标二抗-底物显色。请问到底是什么?本人对双抗夹心ELISA不太懂。
(1)包被:用包被液将包被抗原稀释到合适浓度,每孔100 μL加入板孔中,包被过夜。
(2)封闭:将已包被的板用洗涤液洗涤2次,每孔加入120 μL封闭液,封闭一段时间,取出,甩干备用。
(3)竞争反应:在制备好的板中每孔加入50 μL系列浓度的标准品溶液和50 μL稀释好的酶标抗体溶液,孵育一段时间。
(4)洗板:用洗涤液洗涤5次。
(5)显色反应:每孔加入显色溶液100 μL,孵育一段时间。
(6)终止:每孔各加入终止液,在酶标仪上测定各孔的吸光值。
你是想说固相载体的包被物吧,一般双抗体夹心,固相载体包被物是待检抗原相对应的抗体。
ELISA_双抗夹心法检测抗原 123
老虎C3d巍32021-08-04
ELISA双抗夹心法:夹心法常用于检测大分子抗原,一般之操作步骤为:将具有专一性之抗体固著(coating)于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体加入待测检体,检体中若含有待测之抗原,则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结洗去多余待测检体,加入另一种对抗原专一之一次抗体,与待测抗原进行键结洗去多余未键结一次抗体,加入带有酵素之二次抗体,与一次抗体键结洗去多余未键结二次抗体,加入酵素受质使酵素呈色,以肉眼或仪器读取呈色结果
ELISA的类型
ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂:(1)固相的抗菌素原或抗体,即"免疫吸附剂"(immunosorbent);(2)酶标记的抗原或抗体,称为"结合物"(conjugate);(3)酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件,可设计出各种不同类型的检测方法。用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型:
1.双抗体夹心法测抗原
  双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,操作步骤如下:
1) 将特异性抗体与固相载体联结,形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。
2) 加受检标本,保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。
3) 加酶标抗体,保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
4) 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色,测知标本中抗原的量。在临床检验中,此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清,包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体,一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗,分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性,而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应,作一步检测。
在一步法测定中,当标本中受检抗原的含量很高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合,而不再形成"夹心复合物"。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象,此时反应后显色的吸光值(位于抗原过剩带上)与标准曲线(位于抗体过剩带上)某一抗原浓度的吸光值相同,如按常法测读,所得结果将低于实际的含量,这种现象被称为钩状效应(hook effect),因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时,反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)时,应注意可测范围的最高值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。
假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇,例如HBsAg的a决定簇,也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型,虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性,这也是用单抗作夹心法应注意的问题。
双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子(RF)的干扰。RF是一种自身抗体,多为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF,它可充当抗原成份,同时与固相抗体和酶标抗体结合,表现出假阳性反应。采用F(ab')或Fab片段作酶结合物的试剂,由于去除了Fc段,从而消除RF的干扰。双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响,已被列为这类试剂的一项考核指标。
双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。
2.双抗原夹心法测抗体
反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物,以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释,可直接用于测定,因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的制备,应根据抗原结构的不同,寻找合适的标记方法。
3.间接法测抗体
  间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体(抗人免疫球蛋白抗体)以检测与固相抗原结合的受检抗体,故称为间接法。操作步骤如下:
1)将特异性抗原与固相载体联结,形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。
2)加稀释的受检血清,保温反应。血清中的特异抗体与固相抗原结合,形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后,固相载体上只留下特异性抗体,血清中的其他成份在洗涤过程中被洗去。
3)加酶标抗抗体。可用酶标抗人Ig以检测总抗体,但一般多用酶标抗人IgG检测IgG抗体。固相免疫复合物中的抗体与酶标抗体抗体结合,从而间接地标记上酶。洗涤后,固相载体上的酶量与标本中受检抗体的量正相关。
4)加底物显色
本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。
间接法成功的关键在于抗原的纯度。虽然有时用粗提抗原包被也能取得实际有效的结果,但应尽可能予以纯化,以提高试验的特异性。特别应注意除去能与一般健康人血清发生反应的杂质,例如以E.Coli为工程酶的重组抗原,如其中含有E.Coli成份,很可能与受过E.Coli感染者血甭中的抗E.Coli抗体发生反应。抗原中也不能含有与酶标抗人Ig反应的物质,例如来自人血浆或人体组织的抗原,如不将其中的Ig去除,试验中也发生假阳性反应。另外如抗原中含有无关蛋白,也会因竟争吸附而影响包被效果。
间接法中另一种干扰因素为正常血清中所含的高浓度的非特异性。病人血清中受检的特异性IgG只占总IgG中的一小部分。IgG的吸附性很强,非特异IgG可直接吸附到固相载体上,有时也可吸附到包被抗原的表面。因此在间接法中,抗原包被后一般用无关蛋白质(例如牛血清蛋白)再包被一次,以封闭(blocking)固相上的空余间隙。另外,在检测过程中标本须先行稀释(1:40~1:200),以避免过高的阴性本底影响结果的判断。
4.竞争法测抗体
当抗原材料中的干扰物质不易除去,或不易得到足够的纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多,结合在固相上的酶标抗体愈少,因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯度的,可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质,直接包被不易成功,可采用捕获包被法,即先包被与固相抗原相应的抗体,然后加入抗原,形成固相抗原。洗涤除去抗原中的杂质,然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。竞争法测抗体有多种模式,可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合,抗HBc   ELISA一般采用此法。另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合,洗涤后再加入酶标抗体,与结合在固相上的抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。
5.竞争法测抗原
小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点,因此不能用双抗体夹心法进行测定,可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多,结合在固相上的酶标抗原愈少,最后的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。
6.捕获包被法测抗体
IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断中。间接法ELISA一般仅适用于检测总抗体或IgG抗体。如用抗原包被的间接法直接测定IgM抗体,因标本中一般同时存在较高浓度的IgG抗体,后者将竞争结合固相抗原而使一部份IgM抗体不能结合到固相上。因此如用抗人IgM作为二抗,间接测定IgM抗体,必须先将标本用A蛋白或抗IgG抗体处理,以除去IgG的干扰。在临床检验中测定抗体IgM时多采用捕获包被法。先用抗人IgM抗体包被固相,以捕获血清标本中的IgM(其中包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM)。然后加入抗原,此抗原仅与特异性IgM相结合。继而加酶标记针对抗原的特异性抗体。再与底物作用,呈色即与标本中的IgM成正相关。此法常用于病毒性感染的早期诊断。甲型肝炎病毒(HAV)抗体的检测模式。
类风湿因子(RF)同样能干扰捕获包被法测定IgM抗体,导致假阳性反应。因此中和IgG的间接法近来颇受青睐,用这类试剂检测抗CMV IgGM和抗弓形虫IgM抗体已获成功。
7.ABS-ELISA法
ABS为亲和素(avidin)生物素(biotin)系统(system)的略语。亲和素是一种糖蛋白,分子量60000,每个分子由4个能和生物素结合的亚基组成。生物素为小分子化合物,分子量244。用化学方法制成的衍生物素-羟基琥珀酰亚胺酯可与蛋白质和糖等多种类型的大小分子形成生物素标记产物,标记方法颇为简便。生物素与亲和素的结合具有很强的特异性,其亲和力较抗原抗体反应大得多,两者一经结合就极为稳定。由于一个亲和素可与4个生物素分子结合,因此如把ABS与ELISA法可分为酶标记亲和素-生物素(LAB)法和桥联亲和素-生物素(ABC)法两种类型。两者均以生物素标记的抗体(或抗原)代替原ELISA系统中的酶标抗体(抗原)。在LAB中,固相生物素先与不标记的亲和素反应,然后再加酶标记的生物素以进一步提高敏感度。在早期,亲和素从蛋清中提取,这种卵亲和素为碱性糖蛋白,与聚苯乙烯载体的吸附性很强,用于ELISA中可使本底增高。从链霉菌中提取的链霉亲和素则无此缺点,在ELISA应用中有替代前者的趋势。由于ABS-ELISA较普通ELISA多用了两种试剂,增加了操作步骤,在临床检验中ABS-ELISA应用不多。
手头有P蛋白的鼠单抗和兔多抗,现在想检测培养的肿瘤细胞中P蛋白的含量,用竞争法太浪费抗原了,想用下面的方法(类似夹心法):
包被单抗(过量)——抗原37度1小时——多抗37度1小时——二抗——显色

按道理应该可行,但有一个问题:兔二抗对鼠一抗也会反应吗?
请教各位大神:
我现在用商品化的试剂盒进行夹心法ELISA测定某抗体的浓度,盒子给定了4个标准品,标准品抗体浓度为70000~1000单位,测定步骤中要求对样品进行1:1000稀释后测定。
但是有的样本按照1:1000稀释后,最终OD值大于70000浓度的标准品的OD值,然后使用ELISACALC软件进行四参数拟合,超过了标准曲线的范围,就算不出来这个样品的浓度,但是如果在1000-70000之间的OD值就可以算出相应浓度。请教大神们,接下来我是否可以对样品进行1:2000,1:4000浓度稀释,算出结果后再×2、×4,算作此样品的浓度呢?还是直接给一个>70000的定性结果?或者可以有能算出来的其他软件?
Ps试剂盒中提及Dilutionlinearity(稀释线性?)为141%,这个是什么意思呢?
多谢!!
买的夹心法ELISA试剂盒,样品处理参照国外文献报道,豆类匀浆过夜浸提9000转离心取上清,按照试剂盒操作方式,结果发现10的5、6、7、8次方稀释度所测OD值结果基本一致,都在0.2-0.3之间,样品之间变化不大,如果按照文献理论报道含量应该是7次方的时候在检测限范围内,但7次方各个样品的OD值差异不显著,标曲相关性在0.99以上,OD值范围在0.07到0.85之间;
后采用豆粉浸提12000g离心取上清的方式,发现10的5、6、7、8次方稀释度所测OD值随着稀释度的升高而增大,比如一个样品的OD值5次方为0.2558次方为0.349;
刚接触相关知识,试验任务较重,心中疑问较大,恳请各位高手及时指正,诚谢!
ELISA方法类型及原理123
你大爷MkRk2021-07-27
该法由种类和变化可分为以下几种:
(一)双抗体夹心法
(二)间接法
(三)竞争法
(四)双位点一步法
(五)捕获法测IgM抗体
(六)应用亲和素和生物素的ELISA
双抗夹心法ELISA测定抗原时,会发生交叉反应吗?