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大鼠Flk-2配体(Flt-3)ELISA试剂盒 说明书

来自 : 蚂蚁淘

上海西唐生物科技有限公司 021-55229872, 65333639 www.westang.com

大鼠Flk-2配体(Flt-3)ELISA试剂盒

(用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)

原理

本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 Flt-3 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 Flt-3与单抗结合,加入生物素化的抗大鼠Flt-3,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加入底物工作液显蓝色,最后加终止液硫酸,在450nm处测OD值,Flt-3浓度与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中Flt-3浓度。

试剂盒组成2-8保存)

酶标板(Coated Wells

96

酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate

12ml

10×标本稀释液(Sample Buffer

12ml

20×浓缩洗涤液(Wash Buffer

50ml

标准品Standards):5ng/

2

底物工作液(TMB Solution

12ml

一抗体工作液(Biotinylated Antibody

12ml

终止液Stop Solution

12ml

准备试剂与收集血样

1. 收集标本:血清、血浆(EDTA)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测,2-8保存48小时;更长时间须冷冻(-20 -70 )保存,避免反复冻融。

2. 标准品液配制:使用前加入0.5ml蒸馏水混匀,配成10ng/ml的溶液设标准管8管,第一管加标本稀释液900ul,第二至第八管加入标本稀释液500ul。在第一管中加入10ng/ml标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul,移至第二管。如此反复作对倍稀释,从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。

3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。

4. 洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)

检测程序

1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板充分混匀后置37120分钟。

2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。

3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置3760分钟。

4. 洗板:同前。

5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置3730分钟。

6. 洗板:同前。

7. 每孔加入底物工作液100ul,置37 暗处反应15分钟。

8. 每孔加入100ul终止液混匀。

9. 30分钟内用酶标仪450nm处测吸光值。

结果计算与判断

1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。

2. 标准品100050025012562.531.215.60 pg/ml为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上作图,画出标准曲线。

3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应Flt-3含量。

试剂盒性能

1. 灵敏度最小的Flt-3 检测浓度小于10pg/ml

2. 特异性:可同时检测重组或天然的大鼠Flt-3不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。

3. 重复性:板内、板见变异系数均小于10%。

注意事项

1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔,每次测定应同时做标准曲线。

2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。

3. 板条开封后剩余板条要再封好,保持板条干燥

4. 试剂盒宜置4oC冰箱保存。

5. 试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断!

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