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【求助】竞争法ELISA的灵敏度改良
2021-07-22
问题描述:

我做一个小分子竞争法ELISA实验,抗体是购买来的。
我采用抗体包板,用小分子标记hrp与样本小分子进行竞争实验,做出来的结果的IC50一直在10ng/ml的标准品浓度左右浮动,是否说该抗体只能达到这样的灵敏度要求了,还是说还可以有些其他可以做最后的拯救呢?毕竟卖一个抗体价格也不便宜啊,实验还做不出来的话,老板要发火了…………

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dianaofyezi
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不知道你的抗体和小分子的亲和力如何,如果亲和力高的话会提高敏感性。不知道你做这个试验的目的何在?一般你的样品小分子浓度在什么范围呢?并不是一定非要越低越好啊,要涵盖你能检测的量的范围。
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BLEED
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目的是建立方法能够检测该小分子,我做的是农药残留方面的课题。另外小分子和抗体的亲和力到底怎么看出高低呢?
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seaman_wang
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要提高灵敏度我有两个建议:1、对抗体包被浓度进行调整,一般来说,包被浓度低一些,会有利于灵敏度提高,但是不能太低。2、小分子与Hrp标记比率:小分子与HRP摩尔数比例越小越好,我推荐比值为1最好,这样标记物灵敏度最高。
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