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Molecular Devices/ScanLater: Eu-Streptavidin Kit/Bulk Kit - PN: R8203/1057828647
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Evaluation Kit (R8200)
  • Europium-labeled streptavidin (20 μg)
  • Blocking buffer (40 mL)
  • Wash buffer (100 mL)
  • For 10 mini gels with recommended protocol

 

Bulk Kit (R8203)

  • Europium-labeled streptavidin (60 μg)
  • Blocking buffer (120 mL)
  • Wash buffer (300 mL)
  • For 30 mini gels with recommended protocol
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酶标抗体法,又名酶联免疫吸附法(ELISA),利用酶标记抗原或抗体以检测相应抗原或抗体的一种免疫学标记技术。其基本原理是使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性,而相对应的抗体或抗原与某种酶连接成酶标抗体或抗原,酶标抗体或抗原既保留了免疫活性可以与固相载体表面... 查看更多>
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗小鼠HYP单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的HYP与单抗结合,加入生物素化的抗小鼠HYP,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生 查看更多>
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗小鼠dsDNA单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的dsDNA与单抗结合,加入生物素化的抗小鼠dsDNA,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin 查看更多>
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗小鼠GRO/CINC-1/KC(CXCL1)单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的GRO与单抗结合,加入生物素化的抗小鼠GRO,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的St 查看更多>
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗小鼠G-CSF单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的G-CSF与单抗结合,加入生物素化的抗小鼠G-CSF,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin 查看更多>
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗小鼠IL-8单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的IL-8与单抗结合,加入生物素化的抗小鼠IL-8,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与 查看更多>
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗小鼠IFN-g单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的IFN-g与单抗结合,加入生物素化的抗小鼠IFN-g,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin 查看更多>
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗小鼠PRL单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的PRL与单抗结合,加入生物素化的抗小鼠PRL,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生 查看更多>
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采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗小鼠Galectin-9单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的Galectin-9与单抗结合,加入生物素化的抗小鼠Galectin-9,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记 查看更多>
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Elisa标准曲线绘制方法123
yuxh_19782021-07-23
大家好!
我现在正在应用ELISA试剂盒检测血清TSH
在预实验中,得到如下的结果:
B(450nm)1.575,0.710,0.431,0.225,0.160,0.062
标准品浓度为(ng/ml)0,0.5,1.0,2.5,5,10
根据试剂盒的说明书,以B/B0%为纵坐标,以标准品的浓度为横坐标,在对数坐标纸上绘制标准曲线,在标准曲线上查找对应的浓度范围。
请问最后模拟出的应是一条直线(二元一次方程)还是一条曲线?
请大家指教。
急!!!
:(我第一次用ELISA竞争法来测试样品中抗原含量,发现做出的标准曲线上限,也就是试剂盒中浓度为0的标准品所限定的范围比样品的还低,想不通是哪里出了问题(确保都是按照试剂盒说明书操作)?请哪位高人为我指点迷津。多谢了!!
我做一个小分子竞争法ELISA实验,抗体是购买来的。
我采用抗体包板,用小分子标记hrp与样本小分子进行竞争实验,做出来的结果的IC50一直在10ng/ml的标准品浓度左右浮动,是否说该抗体只能达到这样的灵敏度要求了,还是说还可以有些其他可以做最后的拯救呢?毕竟卖一个抗体价格也不便宜啊,实验还做不出来的话,老板要发火了…………
这是我最近用Elisa做出来的标准品的浓度(X)和OD值(Y),想请教一下各位老师该如何绘制标准曲线,我的试剂说明书上面没有写如何做,只说是做拟合双对数直线回归方程。论坛查了很久也没有找到具体的方法。希望能得到各位老师的指点,谢谢!(附上录入结果的文件)

X     Y
02.532
501.272
1000.688
2500.31
5000.176
10000.116

chymase.dat(0.06k)
大多数国产试剂盒生产厂家会提供对数坐标纸,可直接手工绘制曲线;如果酶标仪带有分析软件,可由软件直接拟合曲线,并自动计算出样本的浓度值;老式的酶标仪只能打印出OD值,需要实验员自己绘制曲线并计算,下面介绍2种绘制竞争法曲线的方法,希望对大家有帮助:一、在对数坐标纸上手工绘制曲线(Log-logit双对数标准曲线)1.实验做双孔,实验结果如下表所示。标准点浓度OD1OD2OD均结合率S002.2262.1922.209S10.11.7251.6791.70277.0%S20.41.3131.3381.325560.0%S31.60.9070.8340.870539.4%S46.40.5170.5170.51723.4%S525.60.2300.2440.23710.7%2)各标准点吸光值取均值。在表中OD均一列。3)将S1~S5的OD均值与S0的OD均相除,为标准点的百分结合率。4)在log-logit坐标纸上绘图。5)坐标纸上横轴从左至右第一个1-9表示为第一个10进位,第二个1-9表示为第二个10进位。第三个1-9表示为第三个10进位。也就是说,如果第一个1代表1ng/ml,则第二个1代表10ng/ml,第三个1代表100ng/ml。因为本次实验标准曲线范围是从0.1ng/ml到25.6ng/ml,则可以用第一个1代表0.1ng/ml,第二个1代表1ng/ml,第三个1代表10ng/ml。6)坐标纸纵轴为百分比。即各标准吸光值的百分结合率。7)曲线第一个数值点是(0.1,77.0%)。则在横轴左起点的1处向上至70~80之间,由70向上7个小格处。8)曲线第二个数值点是(0.4,60.0%)。则在横轴左起第一个4,向上至60的位置。9)曲线第三个数值点是(1.6,39.4%)。则在横轴左起第二个1至2之间,由第二个1向右6个小格。再向上至30~40之间,由30向上9个半小格处。10)曲线第四个数值点是(6.4,23.4%)。则在横轴左起第二个6至7之间,这里6与7之间分为5小格,则每个小格是0.2。所以由第二个6向右2个小格。再向上至20~30之间,由20向上约3个半小格处。11)曲线第四个数值点是(25.6,10.7%)。则在横轴左起第三个2至3之间,这里2与3之间分为10小格,则每个小格是1。所以由第三个2向右5个半小格。再向上至10~20之间,由10向上约半小格处。12)画一条通过各点的直线。要求尽可能多的点在线上,同时剩余的点均匀分布在直线的两边。13)样品也同样由吸光值计算百分结合率,再从纵轴上的相应结合率找到直线上的点,此点对应的横坐标浓度即为样品的浓度。无须换算。本数据来源于百度地图,最终结果以百度地图最新数据为准。
直接竞争ELISA和间接竞争ELISA区别
  1、直接竞争,标记抗原,与检测样品中的抗原竞争抗体。
  2、间接竞争,标记抗体,固相抗原与液相抗原(样品)竞争标记抗体。
  3、定义
  间接竞争法的模型:包被抗原,用HRP-抗体与样本一起加入。样本中的Ag与Solid-Ag竞争HRP-Ab,固相吸附的HRP-Ab与样本中的Ag浓度成反比。
  直接竞争法的模型:包被抗体,用HRP-抗原与样本一起加入。样本中的Ag与HRP-Ag竞争Solid-Ab,固相吸附的HRP-Ag与样本中的Ag浓度成反比。
  4、竞争法的理论基础:是限量抗体。只有在限量抗体基础上,两种抗原才会形成竞争关系。
  5、、间接竞争法具备较高灵敏度原因。
  直接竞争法里,标记抗原与待测抗原均是液相,与抗体的结合机会是一样的,例如有1份标记抗原与1份待测抗原竞争1份抗体,那么有50%的标记抗原能与抗体结合,所以标记抗原的相对结合率为50%。间接法里,固相抗原与抗体的接触面积较小,固相抗原与待测抗原的结合抗体机会是不平等的,接近顺序饱和法,即只有与待测抗原结合剩余的抗体才会与固相抗原结合,同样有1份固相抗原与1份待测抗原竞争1份抗体时,基本上抗体会被待测抗原中和掉,与固相抗原结合的抗体非常少。固相抗原的相对结合率为0%。因此,间接法的抑制曲线斜率会大于竞争法。
  因为抑制率越大则斜率越大,从而灵敏度越大。(假设零管变异5%,以两倍SD为灵敏度限,则为90%相对结合率,则间接法可以在较低的待测抗原浓度达到这一相对结合率,因此灵敏度要高。)
  在进行系统放大时,间接法一般可以使用酶标二抗。因为二抗可以针对抗体的多个部位,所以存在放大效应,从而能提高间接法的灵敏度。直接法一般难以进行放大,常用的有生物 素化抗原与酶标亲和素,但模式上似乎不存在放大效应。
  6、间接法的高灵敏度难以实现的原因:
  双抗体 夹心的免放(IRMA)模式刚出现时,也被模型证明灵敏度优于竞争法的放免(RIA),原因也是较大的斜率,但是IRMA的高灵敏度一直到单抗发展后才得以实现。

竞争法ELISA测出标准曲线已有梯度,但样本OD值偏偏低很多,这导致样本浓度是既往文献报道的的100~1000倍会可能是什么原因?

附:

standerdsample1sample2

blank0.0690.1810.189

totalbinding1.9020.320.28

standerd10.1770.260.203

standerd21.0010.1290.136

standerd31.660.1770.183

standerd41.7060.1680.172

standerd51.6360.1880.127

poscontrol2.250.1410.226


各位大神帮看看是什么原因所致?

我做的是竞争法ELISA,说明书上给的标准曲线是在半对数坐标纸上画的图,用五参数logistic曲线回归做出的R2最高0.9998,但是我看帖子上写的竞争法多用logit-log直线回归,请问各位前辈我应该选用那种方法?非常感谢!
:(本人初次用竞争法测抗原,所得出的标准曲线竟然不能涵盖所有样品数值,致使无法分析数据:(确定都是按照试剂盒说明书操作的,且空白值(除标准品和样品外其他酶试剂都照加)也没有达到所期望的最大。所得数据如下,请哪位高人帮忙分析一下问题所在,另附说明书照片。热切盼望答复
浓度ng/ml标曲1标曲2
01.1941.109
180.8250.8
450.6090.561
900.4490.384
1800.2580.242
3600.1680.159
7200.1150.104
空白孔0.9460.92
最近在建立一个间接竞争法的ELISA定量方法,标准品梯度,复孔都很好,不知道结果如何处理:(
我用的是biotek的EL800酶标仪,有用过这种方法的老师,恳求指点。
以下为实验的标准品OD:

3ug/ml0.182
10.3515
0.30.4515
0.10.628
0.030.777
0.0120.9185
0.0040.9965
BLK1.1755

期待。。。
针对于HBeAb的中和抑制法

采用抗-HBe抗体包被反应板,加入校准品及被测样本,同时加入定量HBeAg中和抗原,经过振荡孵育,洗板后再加入铕标记的抗-HBe,若标本中抗-HBe浓度高,HBeAg将被大量中和,使最后形成的抗-HBe-HBeAg-铕标记抗-HBe复合物减少。增强液(β-NTA)将标记在抗体上的Eu3+解离到溶液中,Eu3+和增强液中的有效成分形成高荧光强度的螯合物,荧光强度和样本中的抗-HBe浓度成反比。
为什么HBeAbHBcAb的ELISA要用竞争法呢?加样快慢差异很大,不能用其他方法吗?谢谢
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