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ELISA 试剂盒及胶体金试纸条开发
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ELISA试剂盒开发工艺流程>>

1.抗体标记及配对
将纯化后的N蛋白多克隆抗体进行HRP标记,确定是否可以形成夹心检测阳性样品的抗体对。(已完成)

2.抗原抗体使用浓度优化检测不同浓度抗原与抗体的反应灵敏度,特异性。确定最优的抗原与抗体的使用浓度。

3.包被条件及反应条件优化
确定包被缓冲液,洗涤缓冲液及酶结合物保存液;确定抗体反应温度及反应时间。

4.批间差及批内差测定
重复性检测,批间差及批内差需小于15%。

5.稳定性测试
通过37度破坏性试验检测试剂盒在37度条件下3天,7天的表现。同时4度留样以备长期检测。一般试剂盒可在4度存放半年以上。

6.临床样品或真实样本检测

7.试剂盒组装
组装3份ELISA试剂盒(96T)包括所有组分及说明书。

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胶体金试纸条开发

1.胶体金标记抗体
将ELISA验证可配对的抗体进行40nm胶体金标记

2.金标试纸条的组装于衬板自上而下依次黏贴预处理过的吸水板、检测垫、胶体金垫和样品垫,真空干燥状态下保存,备用。

3.金标抗体的验证
将N蛋白喷点于检测垫上,将金标抗体喷点在金标结合垫上,跑样10分钟,确定金标抗体的反应性。

4.夹心抗体验证
按照试纸条组装步骤,抗体喷点在检测垫上,并将金标抗体喷点到胶体金结合垫上。将病毒或N蛋白的PBST溶液滴涂到样品垫上,跑样10分钟,根据检测区域现象确定夹心可行性。

5.灵敏度优化
优化包被抗体,金标抗体及缓冲溶液,确定特异性检测病毒的最高灵敏度

6.加速稳定性测试
通过37度破坏性试验检测试剂盒在37度条件下3天,7天的表现。同时4度留样以备长期检测。一般试纸条可在4度存放半年以上。

7.生产小批量产品
生产100条胶体金试纸条,用于客户样品检测确定。

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