逆转录酶病毒包装细胞
逆转录酶病毒包装细胞详细介绍
逆转录酶病毒包装细胞培养条件:
完全培养基:DMEM高糖培养基90%;胎牛血清10%。
培养条件:37.0Ccarbondioxide(CO2),5%
逆转录酶病毒包装细胞传代方法:
收到细胞后,取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况。(一)如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,仅留下10ml培养液在瓶内继续培养。
(二)如果细胞已长满,即可进行传代培养。具体步骤如下:
1.弃去培养液,用PBS(不含钙,镁离子)洗1-2次。
2.加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,倒转放于37度培养箱1-3分钟预热,然后又将培养瓶倒转大约30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆分散,轻敲几下培养培养瓶,细胞随即脱落下来。
3.加入6-8ml完全培养基,吸出,分到新的培养瓶中。1:3~1:6传代;2~3天1次。
注意:传代后一半用我们的培养基,一半用你们的,以免细胞不适应而造成生长不好。
冻存方法:冻存液:基础培养基+5%DMSO+20%FBS
储存:液氮储存
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