2XDirectBloodPCRMaterMixcontainsallthereagentsneededforquickamplificationofgenomicDNAfromwholebloodandotherbodyfluids.Thismastermixcanbealsoappliedtodirectamplificationofexogenousgenetarget,suchasvirus,bacteriaandparasitesfromblood.Themixisoptimizedwithouruniqueinhibitor-resistantDNApolymeraseforbestperformance.Inmostcase,youcandirectlyaddsampleintoPCRmastermixwithoutpre-lysis.
Thereisthe choiceofaninertgreendye inthemix,usedfordirectgelloADIng. ThePCRproductcanbedirectlyloadedonagarosegelwithoutadditionofloadingdyeforelectrophoresis.
GCversionworksforGC-richandcomplextarget.
Highlight
- Timesaving: NoneedforDNAextractionorpre-lysisofsampleasothersimilarcommercialkits
- Convenientandflexibility: Onlyneedaddingprimersandsamplein2Xmix.Thesimilarkitinwhichtheenzymeispackedseparatelyisavailableaswell (Clickhere),soyoucantitrateenzymetofindthebestconcentrationforthetarget
- Highinhibitor-resistance: CanamplifytargetinPCRcontaininghighconcentrationofPCRinhibitors
- Specificity: GCversionworksfor>65%GCcontentandcomplextarget,increasesspecificity
- Simplyanalysis: DirectlyloadingproductsforelectrophoresisafterPCR
Applications
- Genotyping
- Mutationdetection
- Transgenedetection
- Knockoutanalysis
- Sequencing
- Pathogendetection
- Forensicidentification
DataSheet:2XDirectBloodPCRMasterMix
VitaNaviTechnolog是华盛顿大学BarnesWayne教授创办的一家专门从事Taq酶及其相关产品研发与销售的生物公司。BarnesWayne教授是国际上著名的Taq酶专家，也是长片段基因PCR扩增技术的发明人和专利所有人（1993，PNAS；U.S.Patent5,436,149）。20多年来，BarnesWayne教授始终致力于PCR聚合酶，研发了系列TaqDNA聚合酶产品，远销全球40多个国家，是目前国际上生产PCR聚合酶的主要供应商之一。美国VitaNaviTechnology公司研发的新型高耐受性DNA聚合酶为基因检测技术带来了根本性的革新，彻底解决了依赖于纯化的核酸DNA为模板进行PCR扩增这一瓶颈问题。 产品简介 Omni酶是从文库中筛选出来的具有极高耐受性的Taq或者Klentaq突变体，可以直接以全血、血清、土壤、牛奶、巧克力或奶酪等材料为模板一步扩增目的基因，避免了繁琐的核酸DNA提取过程 产品特征：1.对全血、血清、血浆、土壤、植物、巧克力、奶酪和牛奶中的抑制因子具极高的耐受性，可直接对样品进行PCR检测，无需DNA分离。2.可以耐受高达40%的全血，20%的血浆或血清。3.可以从人血液中一步扩增疟疾基因。4.Omni酶节省时间、降低成本.5.直接从微量样品中的扩增，避免样品提取而丢失或污染DNA。
一、Klentaq1/KlentaqLA?实例1：用KelntaqLA扩增大于20kb的大片段基因。??二、高耐受性(Inhibitor-Resistant)聚合酶：OmniTaq/OmniKlentaq产品特征：1.对全血、血清、血浆、土壤、植物、巧克力、奶酪和牛奶中的抑制因子具极高的耐受性，可直接对样品进行PCR检测，无需进行DNA分离纯化。2.可以耐受高达40%的全血，20%的血浆或血清，已应用于多种遗传病的分子诊断和临床检验。3.可用于法医、环境监测、农业、动植物检疫和临床诊断等领域。4.可以从人血液中一步扩增疟疾基因。5.与PCR增强剂结合使用时，其耐受性将进一步提高。6.使用Omni酶不仅节省时间、降低成本，而且实现了从微量样品中的扩增，避免因提取过程所致的DNA丢失或污染。实例2：用OmniTaq（OT）和OmniKlentaq（OKT）从肝素抗凝血液中一步扩增乙肝病毒基因。?实例3：用新突变的Omni酶从富含腐殖酸的人基因组中扩增1.1kb的CCR5基因。?实例4：用新突变的Omni酶从巧克力和黑胡椒中直接扩增基因。?三、热启动聚合酶(Hot-start)聚合酶：CesiumTaq/CesiumKlentaq产品特征：1.CesiumTaq和CesiumKlentaq是一种冷敏感的突变体，在室温条件下聚合酶的活性很低，当升高温度进入PCR循环时聚合酶的活性就全部释放出来，因而具有内置式热启动功能。2.与现有化学修饰或抗体封阻的热启动聚合酶相比，CesiumTaq和CesiumKlentaq的聚合酶活性更高，扩增效果更好。3.CesiumKlentaq具有热启动和高耐受性双重效果。实例5：用CesiumKlentaq扩增基因热启动效果比较?四、PCR增强剂（PCRenhancingcocktails,PEC）产品特征：1.联合使用PEC-1或PEC-2与高耐受性Taq酶（OmniTaqandOmniKlentaq）可以更好的克服样品中各种物质对PCR反应的抑制作用，进一步提高PCR扩增效率，简化PCR操作流程提高。2.PEC有助于从基因组中扩增GC含量高达80%的基因。3.PEC也可用于qPCR（SYBR和Taqmanprobe）。4.新研发的PCR增强剂PEC-3andPEC-4有助于从食品中扩增基因。?实例6：联合使用OmniTaqorOmniKlentaq及PCR增强剂（PEC）从不同类型的牛奶中检测沙门氏杆菌Inv基因。??实例7：联合使用OmniTaqorOmniKlentaq及PCR增强剂（PEC）从人的基因组DNA或全血中直接扩增3个高GC含量的基因。?五、各种特异性一步PCR试剂盒VitaNaviTech公司开发了系列一步法PCR和qPCR试剂盒，可以直接从样品中扩增目的基因。1.DirectBloodPCRKit：从血液中直接扩增目的基因实例8：使用DirectBloodPCRKit从全血中一步扩增CCR5基因
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该仪器采用集成Twister?机械臂的TaqMan?微流体芯片，可以轻松进行数百次实时定量PCR反应。QuantStudio? 7 Flex系统可助您最大限度提高自动化输出能力。
兼容各类应用
优化的实验方案和试剂与直观的软件相结合，兼容最广泛的应用。
获得值得信赖的结果
OptiFlexTM系统拥有六组分离的激发与发射滤片和21片滤片组合，能够确保最高的多重分析能力和化学反应灵活性，提高孔与孔之间、仪器与仪器之间的数据精确性。
1. 主要技术要求
1.1 *内置96孔模块，可升级96孔快速模块及384孔模块；
1.2 *开放5通道检测，连续波长检测，另外可以升级至6色激发光通道和6色检测光通道及21色荧光；
1.3采用检测光滤光片分光，荧光通道开放，用户可自行添加荧光种类；
1.4 *冷CCD检测器96孔/384同步成像；
1.5 *最高升降温速率均可达到：6.5°C/秒；
1.6 *温控范围：4～99.9°C；
1.7动力学线性范围：检测10个起始拷贝，101~109九个数量级，致信度99.7%。区分度要有装机试剂盒验证：能分辨1250、2500、5000、10000、20000拷贝数的初始模板标准品各4个重复验证线性准确度，36个重复的5000拷贝和36个重复的10000拷贝能以99.7%的置信度加以区；
1.8 *有防系统误差方法可供用户选择:内参比荧光Rox,校正加样误差和管间差异；
1.9可分辨单位细胞起始拷贝数1~5拷贝之间的样本99.7%置信度；
1.10 *可分辨起始拷贝数200与300的样本（0.5倍差异）；可实现单拷贝起始模板的区分；
1.11 *高能量合金卤素灯激发,单个光源寿命不低于2000小时；
1.12可升级HRM（高分辨率熔解曲线）分析系统，用于高通量筛选分析单核酸多态性位点（SNP）, 高分辨熔解曲线分辨率： 低至 0.04°C；
1.13支持35分钟以内完成40循环的快速荧光定量PCR实验；
1.14软件组成：
1.14.1配备完备的定量PCR软件,等位基因分析软件。原厂的探针及引物设计软件，可用于PCR引物，巢式PCR，多重PCR引物，RT-PCR引物和Taqman探针的设计和自动测试；
1.14.2可配备相对定量基因表达软件，可同时对无限个数据进行自动的分析、比对、作出柱状图，用于基因表达，药物疗效考核等相对定量分析；
1.14.3配备完备的定量PCR软件,等位基因（SNP）分析软件和阴阳性结果自动判定软件；
1.15试剂耗材开放；
1.15.1可提供原厂人类、大鼠、小鼠、果蝇和拟南芥等多种模式生物全基因组范围表达试剂盒基因表达试剂盒（试剂盒包含:正/反向引物，TaqMan探针，）且同一PCR条件；
1.15.2可提供原厂人类、大鼠、小鼠、果蝇和拟南芥等模式生物microRNA检测试剂盒（试剂盒包含:正/反向引物，TaqMan探针，）且同一PCR条件；
1.15.3支持耗材：国际标准96孔 (0.2 mL) 反应板与光学盖膜，0.2 mL八连管，0.2mL单管；
1.16内置触摸屏电脑：触摸屏电脑可备份还原超过100次的实验数据,可快速地设置多种应用；
*1.17原装进口。
定量结果显示：1.血液中有乙肝病毒DNA分子，受检者被乙肝病毒感染了；2.血液中的乙肝病毒浓度较高，积极治疗吧
荧光定量PCR原理等大家都已经很熟了，我就不细说了，主要是写一些有人问过的事，希望写的内容是大家都关心的。
普通PCR与荧光定量PCR技术区别？
简单的讲PCR技术最早是用于扩增一段特异的PCR片段，用于克隆、测序等实验，后来也将其用于样本中特异的PCR片段有无或非很粗的相对定量，而荧光定量PCR技术则是为了测定样本中特异的PCR片段相对及绝对量，是一种测定特异的PCR片段含量的方式。如测定病人样本中病原体的含量、实验样本中某一特定的mRNA的含量等。
前些年有人讲过普通PCR后，通过电泳也可以进行定量，其实是将PCR产物的定量与PCR样本中模板定量相混了。近两年没有人再讲这类的话了。
SybrGreen、Taqman、Molecularbeacon、LUX这些方法如何选择？
从实验成本来讲，SybrGreen是最好的，基本上就是普通PCR加上一点SybrGreenI荧光染料即可，其信号强度也很好，还可以进行融解曲线分析等，但缺点是只能在一个反应管内进行一种PCR反应的检测，另一个问题是非特异性扩增会影响实验结果，当然也有一些技术解决这些问题，后面会讲到。对于研究人员来讲，如果需要检测的基因很多，而每个反应管中进行一种PCR反应的检测可以满足实验要求，则SybrGreen是最好的选择。
如果需要进行多通道实验，即在一个反应管中进行2种或以上的反应，则要选择其他的方法，最常用的是Taqman、Molecularbeacon，这两种都是探针的方式，由于增加了探针的特异性，因此其扩增曲线反映的就是特异性产物的扩增曲线，不含有非特异性扩增的成分。因此商业用途的检测试剂盒大都采用这一技术，以减少非特异性产物造成错误结论的可能性。其缺点在于探针成本较高，有时设计的探针并不合适，有造成损失的可能性。并且要进行较多的实验条件的优化。这两种探针技术用于商业目的时都有专利问题，据说取得Molecularbeacon的许可权的成本相对较低，但只是据说。
另一种值得一提的是LUX探针，它也可进行多通道实验，但它没有Taqman和Molecularbeacon方法的增加探针特异性的功能，因此只能是一种折中的方案，如果不考虑多通道实验，则不如SybrGreen法.
鼓励性加分
:探讨人巨细胞病毒(HCMV)核酸定量检测试剂(PCR‐荧光探针法)的临床使用及初步评价。
⑴测序是为了验证扩增产物是否为自己的目的产物，既然我的产物长度符合要求，那么有必要进行测序吗？②对于荧光定量检测，我先前的那对引物可以接着用吗？③如用ABI7700采用Taqman探针法检测，探针的设计是自行用软件（如primer5.0）或参考文献提交公司合成（像PCR引物合成）那样吗？④看到有的文章介绍，探针是国外的、国内的，这是什么意思？依我的理解：就像PCR引物合成，只要合成正确，荧光标记完好，国外国内不都一样吗？⑤看到有相应试剂盒提供，其提供的东西有哪几样？是不是探针，引物都包括了，对于那些常见的基因都有相应的试剂盒卖吧，关键是价钱贵吗？
看到一个同事做一课题就是设计荧光定量PCR检测某产物，结果半年也没搞出来，令我感到很生畏。现在还有很多临床病原微生物的荧光定量检测还未成功，有的还需优化，是不是设计较困难，哎呀，还未做，就感到力不从心了，大家帮帮我
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