Product Information
We recommend maintaining the pBirAcm with chloramphenicol (10 ug/ml) until the overnight is diluted to get the cell culture growing exponentially prior to induction.
Cells are supplied as 10 vials of 100ul liquid culture in 30% glycerol. Store at -80°C.
Note: Recombinant proteins made as insoluble inclusion bodies in the BL21DE3 host strain are not biotinylated efficiently even with the BirA over-production provided by the pBirAcm vector.Avidity是一家开创抗体寡核苷酸结合(AOC)的公司。™)AOCs结合了单克隆抗体的组织选择性和基于寡核苷酸的治疗方法的精确性,以克服寡核苷酸传递的障碍和疾病的目标遗传驱动因素。它们的AOC平台,演示了疾病相关RNA在细胞类型和组织中的调节,包括肌肉、心脏、肝脏、肿瘤和免疫细胞。专有的平台技术可以在单一抗体支架上传递多种治疗性寡核苷酸。AOCs具有类似于抗体的药物性质,并允许将寡核苷酸有效载荷传递到其他运载平台所不提供的非肝组织。AOC也有其独特之处,因为可以处理不可药物的目标。 它们正在推进一系列的治疗计划,重点是罕见的肌肉疾病和其他严重疾病。主要项目是开发治疗杜氏肌营养不良和肌营养不良患者的治疗方法。还与制药合作伙伴合作开展项目。并得到了经验丰富的团队和受人尊敬的生命科学投资者的支持。
带有AviTag标签的人类全长ORF克隆已经被构建在多种T7和CMV启动子表达系统,可以立即购买使用。AviTag标签蛋白可以被体内或体外的生物素连接酶生物素化,而且抗生物素蛋白或链霉亲和素可以专一地与生物素结合,正基于这两个反应,AviTag™技术可以应用于蛋白的固定,纯化和显影。虽然Avidity是一个小公司,科学带来的好处及其AviTag已得到认可。目前,AviTag技术已经在22个国家的世界十 大制药公司和研究人员中得到认可。
Avidity带有AviTag标签的人类全长ORF克隆已经被构建在多种T7和CMV启动子表达系统,可以立即购买使用。AviTag标签蛋白可以被体内或体外的生物素连接酶生物素化,而且抗生物素蛋白或链霉亲和素可以专一地与生物素结合,正基于这两个反应,AviTag技术可以应用于蛋白的固定,纯化和显影。 Avitag™技术 亲合力开发和销售用于连接分子的分子亲和力工具。我们的zhuan利AviTag™技术采用来自大肠杆菌的生物素连接酶(BirA),在独特的15氨基酸肽标签上使用单一生物素的高度靶向酶促缀合。AviTag™序列是GLNDIFEAQKIEWHE。以链霉抗生物素蛋白包被的表面为导向,这为分子结合相互作用创造了理想的表现形式。 avidity的AviTag技术的科学优势引起了人们的注意。目前,AviTag技术已被全球十大制药公司中的七家授权,并被22个国家的研究人员使用。 Avidity公司历史 avidity LLC由Millard Cull,Larry Lansing,Ron Gill博士和Mark Seville博士于1996年创立,根据生物素对抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白的非凡亲和力开发肽标签和分子生物学产品。在Affymax担任研究员期间,Millard参与了AviTag技术的发现,发现了其商业潜力,并获得了Affymax的*权利。他创建了avidity作为试剂公司,将AviTag技术的使用权转让给其他公司,并销售与该技术一起使用的产品。 AviTag历史 AviTag是一种获得zhuan利的生物素标记技术,由Affymax博士在Peter Schatz博士的“定向进化”方法中发现,称为“质粒上的肽”。定向进化方法鉴定了许多可被大肠杆菌的BirA酶生物素化的肽序列,这些序列中蕞 好的被称为AviTag。大肠杆菌酶BirA将15个氨基酸的AviTag生物素化为其天然底物生物素羧基载体蛋白(BCCP)的两倍。 使用AviTag技术的蛋白质的酶促生物素化优于蛋白质的化学生物素化,因为BirA酶温和且高度特异性地标记AviTag的赖氨酸残基。在AviTag之前,最小的生物素接受结构域由75个氨基酸组成。
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在缓冲溶液中加入少量强酸或强碱,其溶液pH值变化不大,但若加入酸,碱的量多时,缓冲溶液就失去了它的缓冲作用。这说明它的缓冲能力是有一定限度的。
缓冲溶液的缓冲能力与组成缓冲溶液的组分浓度有关。0.1mol·L-1HAc和0.1mol· L-1NaAc组成的缓冲溶液,比0.01mol·L-1HAc和0.01mol·L-1NaAc的缓冲溶液缓冲能力大。关于这一点通过计算便可证实。但缓冲溶液组分的浓度不能太大,否则,不能忽视离子间的作用。
组成缓冲溶液的两组分的比值不为1∶1时,缓冲作用减小,缓冲能力降低,当c(盐)/c(酸)为1∶1时△pH最小,缓冲能力大。不论对于酸或碱都有较大的缓冲作用。缓冲溶液的pH值可用下式计算:
此时缓冲能力大。缓冲组分的比值离1∶1愈远,缓冲能力愈小,甚至不能起缓冲作用。对于任何缓冲体系,存在有效缓冲范围,这个范围大致在pKaφ(或pKbφ)两侧各一个pH单位之内。
弱酸及其盐(弱酸及其共轭碱)体系pH=pKaφ±1
弱碱及其盐(弱碱及其共轭酸)体系pOH=pKbφ±1
例如HAc的pKaφ为4.76,所以用HAc和NaAc适宜于配制pH为3.76~5.76的缓冲溶液,在这个范围内有较大的缓冲作用。配制pH=4.76的缓冲溶液时缓冲能力最大,此时(c(HAc)/c(NaAc)=1。
制备
为了配制一定pH的缓冲溶液,首先选定一个弱酸,它的pKaφ尽可能接近所需配制的缓冲溶液的pH值,然后计算酸与碱的浓度比,根据此浓度比便可配制所需缓冲溶液。
以上主要以弱酸及其盐组成的缓冲溶液为例说明它的作用原理、pH计算和配制方法。对于弱碱及其盐组成的缓冲溶液可采用相同的方法。
缓冲溶液在物质分离和成分分析等方面应用广泛,如鉴定Mg2+ 离子时,可用下面的反应:
白色磷酸铵镁沉淀溶于酸,故反应需在碱性溶液中进行,但碱性太强,可能生成白色Mg(OH)2沉淀,所以反应的pH值需控制在一定范围内,因此利用NH3·H2O和NH4Cl组成的缓冲溶液,保持溶液的pH值条件下,进行上述反应。
常用缓冲液配制
枸橼酸-磷酸氢二钠
甲液:取枸橼酸21g或无水枸橼酸19.2g,加水使溶解成1000ml,置冰箱内保存。
乙液:取磷酸氢二钠71.63g,加水使溶解成1000ml。
取上述甲液61.45ml与乙液38.55ml,混合,摇匀,即得。
氨-氯化铵缓冲液
取氯化铵1.07g,加水使溶解成100ml, 再加稀氨溶液(1→30)调节pH值至8.0,即得。
氨-氯化铵缓冲液
取氯化铵5.4g,加水20ml溶解后,加浓氨溶液35ml,再加水稀释至100ml,即得。
醋酸-醋酸钠缓冲液
取无水醋酸钠20g,加水300ml溶解后,加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60~80ml,至溶液从蓝色转变为纯绿色,再加水稀释至1000ml,即得。
醋酸-醋酸钠缓冲液
取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀释至1000ml,即得。
醋酸-醋酸钠缓冲液
取醋酸钠54.6g,加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后,加水稀释至500ml,即得。
醋酸-醋酸铵缓冲液
取醋酸铵7.7g,加水50ml溶解后,加冰醋酸6ml与适量的水使成100ml,即得。
醋酸-醋酸铵缓冲液
取醋酸铵77g,加水约200ml使溶解,加冰醋酸57ml,再加水至1000ml,即得。
醋酸-醋酸铵缓冲液
取醋酸铵100g,加水300ml使溶解,加冰醋酸7ml,摇匀,即得。
磷酸盐缓冲液
取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml,加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml,用水稀释至1000ml,即得。
当往某些溶液中加入一定量的酸和碱时,有阻碍溶液pH变化的作用,称为缓冲作用,这样的溶液叫做缓冲溶液。弱酸及其盐的混合溶液(如HOAc与NaOAc),弱碱及其盐的混合溶液(如NH3·H2O与NH4Cl)等都是缓冲溶液。
参考资料:http://baike.baidu.com/view/901429.htm
1、组成成分:
A、1×TE缓冲液:10mmol/LTris.Cl;1mmol/LEDTA,pH8.0。
B、1×TAE缓冲液:40mmol/LTris-乙酸;2mmol/LEDTA,pH8.0。
C、1×TBE缓冲液:45mmol/LTris-硼酸;1mmol/LEDTA,pH8.0。
2、用途:
A、TE缓冲液:一般用作溶解剂或保持剂,常用于溶解DNA,能稳定储存DNA。
B、TAE缓冲液:生物学中使用最广泛的核酸电泳缓冲液,主要用于DNA的琼脂糖凝胶电泳。
C、TBE缓冲液:生物学中常用的核酸电泳缓冲液,主要用于DNA的琼脂糖凝胶电泳。
3、TAE和TBE缓冲液的选择:
TAE和TBE缓冲液都可以用于DNA的琼脂糖凝胶电泳,两者各有利弊,应根据实际情况选择不同的缓冲液。
4、注意:
TBE浓溶液长时间存放后会形成沉淀物,出现沉淀后应予以废弃。
碳酸氢钠溶液是一种co2缓冲液,当瓶内二氧化碳量减少时,碳酸氢钠溶液释放co2,反之吸收co2.因此它能保持瓶内二氧化碳量大致不变.
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