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separopore/Protein A Blue Separopore® 4B-MB/5 mL/20181042-2
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2021-09-15
本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。 查看更多
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2018-12-26
Purification of KHC Motor Domain ProteinMaterials Induced cells (2 - 5 g pellet of pET/KHC in BL21(DE3)pLysS host cells)HEM buffer = 10 mM HEPES pH 7.21 mM DTT 查看更多
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2018-12-26
Purification of CD21) Cells are pelleted (~3 - 4000 g for 10 min.) and resuspended in pre-chilled 50 mM malonate (pH 5.2-5.3) with 1mM EDTA (~40ml of buffer pe 查看更多
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2021-08-12
PK-120 的纯化及肽段氨基酸序列分析实验的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。<link rel="stylesheet" type="text/css" href="/ueditor... 查看更多
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2021-07-31
疏水相互作用层析是以介质疏水基团和蛋白质疏水区域间的亲和作用为基础的。疏水力是浸在一种极性液体（如水）中的非极性物质的排斥力。胞膜蛋白都具有一个明显的疏水区域以锚定在膜上。可溶性蛋白质在外表面上可能存在疏水小区，它促进蛋白复合物的形成，也可能是疏水配基结合部位或活性部位。这些暴露的疏水区对疏水层析纯化而言足非常理想的。尽管疏水层析利用相对非持异的亲和力分离纯化蛋白质，而且不具有高分辨率，但是该法很有用。 查看更多
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2021-07-29
染料配基层析不是真正意义的亲和层析，因为它们并不是与它们结合的蛋白质的天然配基。然而染料柱能很好地结合蛋白质，并能导致满意地纯化蛋白质。事实上，有时这种结合甚至比正常的配基更紧。染料配基柱通常是廉价和稳定的，并且具有较高的蛋白质结合容量。所以染料配基层析能作为蛋白质纯化中有价值的步骤之一。 查看更多
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2021-09-22
虽然亲和层析法是进行特异性抗体纯化的首选，然而有时这种纯化方式却非必需，或者无法实施进行。在大多数锖况下，运铁蛋白可发生共沉淀或共纯化，能用凝胶滤过层析去除之。 查看更多
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2021-07-20
杆状病毒是一类在自然界中专一性感染节肢动物的DNA病毒，病毒粒子呈杆状，基因组为双链环状DNA分子，DNA以超螺旋形式压缩包装在杆状衣壳内，大小在90~180 Kb之间。目前杆状病毒作为高效、安全的无公害生物虫剂广泛应用于害虫防治。 查看更多
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2021-09-08
来源：《精编分子生物学实验指南》第五版 查看更多
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关于包涵体的纯化是一个令人头疼的问题，包涵体的复性已经成为生物制药的瓶颈，关于包涵体的处理一般包括这么几步：菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化，内容比较庞杂 一、菌体的裂解 1、怎样裂解细菌？ 细胞的破碎方法 1.高速组织捣碎：将材料配成稀糊状液，放置于筒内约1/3体积， 查看更多
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2018-12-26
在生化制备中，沉淀主要用于浓缩目的，或用于除去留在液相或沉淀在固相中的非必要成分。在生化制备中常用的有以下几种沉淀方法和沉淀剂： 1．盐析法 多用于各种蛋白质和酶的分离纯化。 2．有机溶剂沉淀法 多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化，有时也用于蛋白质沉淀。 3． 查看更多
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2021-08-27
从自然环境中分离和纯化噬菌体实验的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。<link rel="stylesheet" type="text/css" href="/ueditor/themes... 查看更多
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免疫层析怎样提高包被抗体的稳定性123
血色蔷薇TA7822017-10-03
elisa抗原包被和抗体包被的区别
（一）包被用抗原
用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。天然抗原可取自动物组织、微生物培养物等，须经提取纯化才能作包被用。如HBsAg可以从携带者的血清中提取，一般的细菌和病毒抗原可以从其培养物中提取，蛋白成份抗原可从富含此抗原的材料中提取等（例如AFP从脐带血或胎肝中提取）。重组抗原是抗原基因在质粒体中表达的蛋白质抗原，多以大肠杆菌或酵母菌为质粒体。重组抗原的优点是除工程菌成份外，其他杂质少，而且无传染性，但纯化技术难度较大。以大肠杆菌为质粒体的重组抗原如不能充分除大肠杆菌成份，用于ELISA试剂盒，在反应中可出现假阳性，因不少受检者受大肠杆菌感染而在血清中存在抗大肠杆菌抗体。重组抗原的另一特点是能用基因工程制备某些无法从天然材料中分离的抗原物质。例如丙型肝炎病毒（HCV）尚不能培养成功，而且丙肝病人血清中HCV抗原含量极微。目前检测抗HCVELISA中所用包被抗原大多为根据HCV的基因克隆表达而制备的重组抗原。在传染病诊断中，不少重组抗原如HBsAg、HBeAg和HIV抗原等均在ELISA中取得应用。合成多肽抗原是根据蛋白质抗原分子的某一抗原决定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。多肽抗原一般只含有一个抗原决定簇，纯度高，特异性也高，但由于分子量太小，往往难于直接吸附于固相上。多肽抗原的包被一般需先使其与无关蛋白质如牛血清白蛋白质（BSA）等偶联，借助于偶联物与固相载体的吸附，间接地结合到固相载体表面。应用多肽抗原的另一注意点为他仅能检测与其相应的抗体。一种蛋白质抗原往往含有多个不同的能引起抗体产生的决定簇，因此在受检血清中的其他抗体就不能与该多肽抗原发生反应。另外，某些微生物发生变异时往往发生抗原结构变化，在这种情况下，用个别多肽抗原进行包被可引起其他抗体的漏检。
（二）ELISA试剂盒包被用抗体
包被固相载体的抗体应具有高亲和力和高特异性，可取材于抗血清或含单克隆抗体的腹水或培养液。如免疫用抗原中含有杂质（即便是极微量的），在抗血清中将出现杂抗体，必须除去（可用吸收法）后才能用于ELISA，以保证试验的特异性。抗血清不能直接用于包被，应先提取IgG，通常采用硫酸铵盐析和Sephadex凝胶过滤法。一般经硫酸铵盐析粗提的IgG已可用于包被，高度纯化的IgG性质不稳定。如需用高亲和力的抗体包被以提高试验的敏感性，则可采用亲和层析法以除去抗血清中含量较多的非特异性IgG。腹水中单抗的浓度较高，特异性亦较强，因此不需要作吸收和亲和层析处理，一般可将腹水作适当稀释后直接包被，必要时也可用纯化的IgG。应用单抗包被时应注意，一种单抗仅针对一种抗原决定簇，在某些情况下，用多种单抗混合包被，可取得更好的效果。展开
（一）包被用抗原
用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。天然抗原可取自动物组织、微生物培养物等，须经提取纯化才能作包被用。如HBsAg可以从携带者的血清中提取，一般的细菌和病毒抗原可以从其培养物中提取，蛋白成份抗原可从富含此抗原的材料中提取等（例如AFP从脐带血或胎肝中提取）。重组抗原是抗原基因在质粒体中表达的蛋白质抗原，多以大肠杆菌或酵母菌为质粒体。重组抗原的优点是除工程菌成份外，其他杂质少，而且无传染性，但纯化技术难度较大。以大肠杆菌为质粒体的重组抗原如不能充分除大肠杆菌成份，用于ELISA试剂盒，在反应中可出现假阳性，因不少受检者受大肠杆菌感染而在血清中存在抗大肠杆菌抗体。重组抗原的另一特点是能用基因工程制备某些无法从天然材料中分离的抗原物质。例如丙型肝炎病毒（HCV）尚不能培养成功，而且丙肝病人血清中HCV抗原含量极微。目前检测抗HCVELISA中所用包被抗原大多为根据HCV的基因克隆表达而制备的重组抗原。在传染病诊断中，不少重组抗原如HBsAg、HBeAg和HIV抗原等均在ELISA中取得应用。合成多肽抗原是根据蛋白质抗原分子的某一抗原决定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。多肽抗原一般只含有一个抗原决定簇，纯度高，特异性也高，但由于分子量太小，往往难于直接吸附于固相上。多肽抗原的包被一般需先使其与无关蛋白质如牛血清白蛋白质（BSA）等偶联，借助于偶联物与固相载体的吸附，间接地结合到固相载体表面。应用多肽抗原的另一注意点为他仅能检测与其相应的抗体。一种蛋白质抗原往往含有多个不同的能引起抗体产生的决定簇，因此在受检血清中的其他抗体就不能与该多肽抗原发生反应。另外，某些微生物发生变异时往往发生抗原结构变化，在这种情况下，用个别多肽抗原进行包被可引起其他抗体的漏检。
（二）ELISA试剂盒包被用抗体
包被固相载体的抗体应具有高亲和力和高特异性，可取材于抗血清或含单克隆抗体的腹水或培养液。如免疫用抗原中含有杂质（即便是极微量的），在抗血清中将出现杂抗体，必须除去（可用吸收法）后才能用于ELISA，以保证试验的特异性。抗血清不能直接用于包被，应先提取IgG，通常采用硫酸铵盐析和Sephadex凝胶过滤法。一般经硫酸铵盐析粗提的IgG已可用于包被，高度纯化的IgG性质不稳定。如需用高亲和力的抗体包被以提高试验的敏感性，则可采用亲和层析法以除去抗血清中含量较多的非特异性IgG。腹水中单抗的浓度较高，特异性亦较强，因此不需要作吸收和亲和层析处理，一般可将腹水作适当稀释后直接包被，必要时也可用纯化的IgG。应用单抗包被时应注意，一种单抗仅针对一种抗原决定簇，在某些情况下，用多种单抗混合包被，可取得更好的效果。展开
求助:IgM纯化问题 蛋白质和糖学技术讨论版论坛123
你大爷FaKv2021-07-21
IgM代表的是近期感染病毒或者病原体的一个指标，表明在两周左右的时间内感染了病原体，所以检测IgM可以准确判断是否是新发感染病原体。2、开发何种形式的诊断用试剂盒，你说的方法都是ELISA方法，该方法中包括了检测抗体或者检测抗原等技术方法。具体如何来决定，还看你想从哪方面是想检测抗原还是想检测抗体，还有就是技术路线是否可行，包括单抗制备，抗原表达及纯化等等，可能也应该考虑成本等因素，只有综合考虑上述因素，才能确定用那种方法来研制诊断用试剂盒。
补充一点的是有些病毒在人群中的感染是很普遍的,比如HCMV.对于这些病毒IgM的检测结果可以推测是否为近期感染.但这一类病毒其检测的临床意义经常是当其再激活感染时.比如:HCMV感染后就在末梢单个核细胞中潜伏起来,对于正常人而言是不致病的,但当出现HIV感染或应用免疫抑制剂时会出现激活感染而且经常导致严重疾患.对于这种再激活感染虽然也有IgM的升高,但是却在现在ELISA技术的检测限以下,因此是检测不到的,这时就必须进行针对其抗原的检测。
补充一点的是有些病毒在人群中的感染是很普遍的,比如HCMV.对于这些病毒IgM的检测结果可以推测是否为近期感染.但这一类病毒其检测的临床意义经常是当其再激活感染时.比如:HCMV感染后就在末梢单个核细胞中潜伏起来,对于正常人而言是不致病的,但当出现HIV感染或应用免疫抑制剂时会出现激活感染而且经常导致严重疾患.对于这种再激活感染虽然也有IgM的升高,但是却在现在ELISA技术的检测限以下,因此是检测不到的,这时就必须进行针对其抗原的检测。
...双抗体夹心法的一抗和二抗可以来源于同一种属么? 免疫学讨论版...123
2017-10-03
不是。二抗是指抗一抗的抗体，也就是抗体的抗体，一般因放大信号和特异性范围大易获得和制备应用广泛。
双抗无论是在免疫学还是细胞操作，细胞培养中都不与二抗等同。双抗可以是抗一种抗原的两个抗体，去双抗夹心法。也可以是抗不同类型反应的作用物，如抗凝剂素。一般指两种抗生素。
双抗无论是在免疫学还是细胞操作，细胞培养中都不与二抗等同。双抗可以是抗一种抗原的两个抗体，去双抗夹心法。也可以是抗不同类型反应的作用物，如抗凝剂素。一般指两种抗生素。
问个,一抗二抗结合的问题(elisa)123
星辰之守望者2017-10-03
一抗、二抗如何保存 123
vvuehon2021-08-06
工作液根据需要稀释在5%奶粉里，再加入少量叠氮化钠（大约0.01% w/v），4度保存。Alisa_lin(站内联系TA)分装，-20度保存。不要反复冻融，没有用过粉末的二抗，按说明书呗石头2011(站内联系TA)液体的一抗没加甘油的话尽量不要放在负二十，因为用的时候反复冻融不好。粉末状的二抗负二十就行了sayaya(站内联系TA)液体的一抗直接放-80度贮藏，可保存5年以上；
液体的一抗加50%甘油，-20度也不会冻结，可保存3-5年；
经常使用时取出一小份，4度可使用半年之久；
粉末状的二抗直接-20或-80度贮藏就行了。
液体的一抗加50%甘油，-20度也不会冻结，可保存3-5年；
经常使用时取出一小份，4度可使用半年之久；
粉末状的二抗直接-20或-80度贮藏就行了。
AChE试剂盒 | 每日生物评论123
2021-08-14
应用双抗体夹心法测定标本中小鼠乙酰胆碱酯酶（AchE）水平。用纯化的小鼠乙酰胆碱酯酶（AchE）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入乙酰胆碱酯酶（AchE），再与HRP标记的乙酰胆碱酯酶（AchE）结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的乙酰胆碱酯酶（AchE）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠乙酰胆碱酯酶（AchE）含量。
【二抗】二抗是什么_孵育时间_稀释液_标记_稀..._英文,elisa二抗西域123
『帀』2017-10-03
顺手采纳答案
一抗的英语是 resistance No.1，二抗resistance No.2.
一抗的英语是 resistance No.1，二抗resistance No.2.
质粒DNA提取和纯化试剂盒/质粒DNA提取和纯化试剂盒/质粒DNA...123
炎汐30082021-08-03
DNA纯化试剂盒与质粒DNA提取试剂盒这2者之间有区别吗？
我的实验是这样的，先纯化质粒，然后做酶切，再纯化DNA。
最后一步其实也可以用切胶回收试剂盒，我怕做不好，所以想选用DNA纯化试剂盒，但不知跟质粒DNA提取试剂盒是否有区别，因为说明书上说可以用Invitrogen的K210001.我搜索看了一席啊，觉得那个是提取质粒的小提啊。所以产生这个疑问，请大侠告知DNA纯化试剂盒与质粒DNA提取试剂盒这两者之间有区别吗？
用哪个公司的DNA纯化试剂盒比较好。谢谢啦！
我的实验是这样的，先纯化质粒，然后做酶切，再纯化DNA。
最后一步其实也可以用切胶回收试剂盒，我怕做不好，所以想选用DNA纯化试剂盒，但不知跟质粒DNA提取试剂盒是否有区别，因为说明书上说可以用Invitrogen的K210001.我搜索看了一席啊，觉得那个是提取质粒的小提啊。所以产生这个疑问，请大侠告知DNA纯化试剂盒与质粒DNA提取试剂盒这两者之间有区别吗？
用哪个公司的DNA纯化试剂盒比较好。谢谢啦！
(请教)抗体后注有(H+L)有何特殊含义 免疫学讨论版 专业医生...123
jiwiny2021-08-07
如GoatAnti-RabbitIgG(H+L)，H+L是什么意思？
Westernblot一抗和二抗的选择 123
言小郝2021-08-12
我的二抗加显影液在机器里曝光10s的结果，这是不是说明右边这个效价不高了啊
国内ELISA试剂盒哪个品牌好?123
★鲁鲁修★H9d2017-10-03
ELISA试剂盒很多牌子都不错，关键看灵敏度、实验效果、技术支持以及实验经费来决定
抗体纯化方法介绍 实验方法123
echoloving3182021-07-26
想通过亲和层析来纯化抗血小板特异性抗体（抗GPIIb/IIIa抗体和抗GPIbα抗体），能否做到呢？谢谢！
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