小分子单抗制备为什么有效价但是没有竞争
2017-03-01
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橙枫
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dxy_iwkuo6g 做的小分子四环素的单抗,免疫小鼠用的是偶联BSA的四环素,包板用的是偶联OVA的四环素。进行了6次免疫,包板浓度5ug/ml,5免和6免后测得效价大概6w,但是加标品进去,标品和抗体没有结合能力。准备重新合成全抗原,但是不知道怎么设计比较科学,看论坛说小分子单抗,全抗原合成很关键,可我不知道怎么去做你的标准品应该是和偶联了bsa或者ova的四环素抗原结合的,和你四环素单抗应该是竞争关系,标准品和单抗应该是不会结合的。按你的说法,我理解的是,你的情况:1.你加不同梯度抗体后,读值有变化,证明抗体有校价;2.在固定抗体量不变,你加入梯度标准品后,反应读值没有明显的变化;原因可能有以下几点:1.你的标准品是否过期,还有没效价?是否能和你的ova抗原反应?建议:做下标准品和抗原的反应看看有没有活性。没活性了从新制备或者购买2.你的抗体亲有问题和力太高,或者抗原有问题与你这个抗体的结合太强,总之就是ab和ova衍生物抗原的结合太强,你的标准品量不足以竞争,所以没反应。如果是这个原因的话,建议:1.先增加大量的标准品验证下是不是真的没竞争,还是竞争太弱。2.假设你抗体没问题,换其他的合成抗原,试试不同载体,不同投料比,不同合成方法的抗原,做下竞争性。3.假设你抗原没问题,从新制备抗体吧。按不同载体,不同投料比,不同合成方法做成的抗原,拿来做免疫原,都打小鼠试试。4.抗原和抗体都有问题,最简单的方法,去买市面上比较好的原料做对照,按对照配对的模式做吧,以对照为模仿标准,你2个原料至少有一个是没问题的,做好一个在重新做另外一个。小分子筛到一个好的抗原抗体配对是要看运气的,多免疫几轮小鼠,多试试不同抗原和抗体的配对,希望你能成功。
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百智生物
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你怎么测定的血清效价?血清是多抗如何判定未与包被的小分子偶联载体反应呢
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橙枫
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做的不是鼠单抗吗?取腹水做下初纯试试
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