基于细胞的检测常见问题解答 - Platypus Technologies
Oris™ 3D 嵌入式入侵分析在细胞入侵方面优于 Boyden / transwell 分析，因为在整个分析过程中，细胞以 3D 形式嵌入，而在 Boyden / transwells 分析中，细胞被接种在 2D 表面上，这显着改变了细胞生理学（例如参考文献 1、2、3、4、5、6、7、8）。 2. 为什么 Oris™ 和 Oris™ Pro 检测比划痕检测更好？
Oris™ 和 Oris™ Pro 检测不会损伤细胞，而划痕检测会。更重要的是，均匀的无细胞检测区提供了比划痕分析更可靠的统计数据，正如本出版物和本应用说明所说明的那样。
3. 我应该使用 Oris™ 还是 Oris™ Pro 试剂盒?Oris™ 检测使用物理\"塞子”型屏障在 96 孔板的每个孔的中心创建一个中央无细胞检测区。使用 Oris™ 在测定设计中获得最大的灵活性。如果您的细胞需要很长时间才能粘附在板表面使用缺少虚拟掩蔽的读板器 – 将 96 孔掩膜夹在板的背面（注意：掩膜不适合Oris™ Pro 板）。Oris™ Pro 检测使用可溶性凝胶在 96 孔或 384 孔板的每个孔的中心创建一个中央无细胞检测区。使用 Oris™ ProFor 最简单的分析设计和完全自动化。对于粘附的细胞e 快速到达板表面。为了获得最高质量的光学器件 4. 如何选择板涂层？Oris™ 套件提供经 TC 处理、I 型胶原蛋白涂层或纤连蛋白涂层的板。如果您不确定要为您的细胞类型使用哪种涂层，请测试 Oris™ 细胞迁移检测 - 三涂层产品。每块板有 32 个孔，分别包含三种涂层，因此您可以测试哪种涂层在您的实验中效果最好。
Oris™ Pro 检测试剂盒提供经 TC 处理或胶原蛋白 I 涂层的板。如果您不确定要为您的细胞类型使用哪种涂层，您可以测试每种类型的板之一，以评估哪种涂层在您的实验中效果最好。或者，您可以测试 Oris™ 细胞迁移测定——三涂层产品——虽然该板使用塞子而不是可溶性凝胶来创建检测区，但一项实验应该可以揭示经 TC 处理或经胶原蛋白 I 处理的表面是否更适合您Oris™ Pro 格式的细胞类型。
5. 涂板如果是我自己，我是否要取下塞子，涂上盘子，然后将塞子放回原处？不。如果您想自己包被板，我们推荐 Oris™ 通用细胞迁移组装套件。这些套件随单独包装的板和塞子一起提供。根据需要涂上平板，然后在开始实验之前插入塞子。
6. 我计划使用的细胞系是否经过 Oris™ 测试？Oris™ Migration，Oris ™ Invasion、Oris™ Pro Migration、Oris™ Pro Invasion 和 Oris™ 3D Embedded Invasion 分析设计用于大多数贴壁细胞系。非贴壁细胞也可用于 Oris™ 3D 嵌入式入侵检测。 Platypus 使用 HT-1080、MDA-MB-231、PC3 和 HUVEC 细胞对 Oris™ 产品进行了许多成功的测试。许多其他细胞系已被像您这样的客户使用 Oris™，谷歌学术搜索（Oris™ AND\"细胞迁移”）或（Oris™ AND\"细胞入侵”）将显示。
7. 我应该在 e 中播种多少个细胞每一个孔？对于 Oris™ 迁移、Oris™ Pro 迁移和 Oris™ Pro 侵袭检测，目标是在实验开始时在细胞禁区周围形成 95-100% 汇合的单层细胞。以较高密度接种可能会导致在检测开始时检测区中的细胞，而以较低密度接种将在迁移后检测区中产生较少的迁移细胞。通常，在 Oris™ 和 Oris™ Pro 96 孔板中每孔接种 20,000 – 75,000 个细胞，在 Oris™ Pro 384 孔板中每孔接种 2,500 – 10,000 个细胞。对于您的第一个实验，我们建议测试几种不同的细胞接种密度，如检测方案附录 1 中所述。
对于 Oris™ 3D 嵌入式入侵检测，我们建议每孔接种 30,000 – 50,000 个细胞。对于某些细胞系，每孔可接种多达 75,000 个细胞，但许多侵入性细胞系表达高水平的基质金属蛋白酶，可将胶原蛋白降解至塌陷甚至液化的程度efies 在高细胞密度。添加较少的细胞可以改善这个问题。
8. 我应该允许细胞迁移或侵入多长时间？为了获得最佳统计数据，选择一个检测时间，使未处理的细胞至少关闭 2 /3 检测区原有开放面积，但封闭不到100%。 Oris™ 和 Oris™ Pro Cell Migration and Invasion Assays 的一个优势是您可以在孵育期间随时检查实验以确定细胞移动了多远。第一次运行 Oris™ 检测时，只需定期在显微镜下观察细胞以评估迁移/侵入的程度，并在观察到适当程度的移动时停止实验。
由于不同细胞类型之间的细胞运动差异很大，最佳孵育时间会因不同的细胞类型而异。迁移时间可能从 16 到 72 小时不等，而入侵时间可能从 1 – 6 天不等。对于扩展实验，我们重新建议您每 48-72 小时用新鲜抑制剂更换上述培养基。
9. 我可以只使用部分测定板并使用其他孔进行后续实验吗？大多数 Oris™所有 Oris™ Pro 套件都配置为在单个实验中使用。对于 Oris™，塞子在使用前必须冷藏保存，以保持完美的结构配合，从而产生可再现的、紧密结合的禁区。对于 Oris™ Pro，培养箱中的湿度会使未使用的孔中的凝胶水化，这将在后续实验中产生禁区大小和凝胶溶解时间的可变性。
如果每个实验需要少于 96 个孔, 考虑 Oris™ 细胞迁移组装套件 – FLEX，它包括四个 96 孔板和四包 24 个塞子。每个盘子只能使用一次，塞子的数量是四的倍数。
10. Oris™ 塞子是否可以与新的无菌盘子重复使用？否。塞子必须冷藏保存直到用于保持完美的结构配合，产生可重现的、紧密结合的禁区。已在 37°C 下放置任何时间的塞子将无法正确贴合，导致不规则、可变的禁区。
11. 使用时如何知道塞子是否正确插入Oris™ 组装套件？正确插入塞子的尖端会在井底形成靶心图案。要查看此靶心图案，请在插入塞子后将盘子翻转过来，然后将盘子倾斜一个角度。通过透明的底面，您将能够在每个孔的中心看到这种靶心图案。可以重新插入未密封好的塞子，直到尖端正确放置。在此处查看该技术的视频。
12. 为什么不提供带有 24 孔板的试剂盒？24 孔板中的每个孔都比 96 孔板中的孔大得多孔板。因此，每个数据点需要更多的细胞，更多的铜培养基、更多添加剂和更多时间来完成检测。这太贵了。此外，其他地方提供的 24 孔迁移和侵袭检测板的成本与 Oris™ 96 孔板大致相同或更高，因此您甚至在开始检测之前每个数据点的成本就会翻两番。
13。我可以在别处购买的盘子上使用 Oris™ 塞子吗？不可以。虽然 96 孔板是\"行业标准”，但孔尺寸因供应商而异。由于塞子必须完美贴合才能产生可重现的、紧密结合的禁区，因此只有 Oris™ 板才能正常工作。
14. 是否有任何提示可以使用 Oris™ 塞子工具移除塞子？首先将盘子牢牢固定在工作台面上，以固定盘子。接下来，将塞子工具的尖齿滑到塞子条骨干的顶部之间，使塞子工具的底面与板的顶面平行。最后，垂直提起塞子工具以移除塞子g认真地。请在此处查看该技术的视频。
请勿使用塞子工具作为杠杆从孔中撬出塞子，因为这样做可能会导致细胞移位。
15. 如何建立预迁移/入侵参考井？预迁移/入侵参考井用于确定检测区的大小和位置，以量化实验井的移动程度。
对于 Oris™ 检测，您可以在读取结果之前保留一些塞子。由于 Oris™ Pro 检测缺少塞子，此方法不适用。
对于 Oris™ Pro 和 Oris™ 检测，建立参考孔的替代方法是：
只需在时间收集图像迁移即将开始时为零。
在测定开始时将固定剂添加到复制孔或复制板中。然而，当在板的一部分孔中固定细胞时，这种方法可能会影响固定孔附近的细胞，因为它们可能会暴露在固定剂蒸汽中。
在测定开始时向参考孔中添加迁移或入侵抑制剂，例如细胞松弛素 D。一定要加入足够的抑制剂以完全阻断细胞运动。
您不妨在这里阅读相关的应用说明。
16. 为什么我的禁区内有细胞检测开始？在去除 Oris™ 塞子或溶解 Oris™ Pro 凝胶后，检测板可能已经摇晃。将板从工作台转移到培养箱时要小心。
细胞系可能与板表面粘附不良。可能的解决方案是：
如果您使用经过 TC 处理的板，请尝试使用胶原蛋白 I 或纤连蛋白涂层板以获得更好的粘附性。如果使用 Oris™ 检测，请在添加培养基之前留出更长的时间让细胞粘附。如果使用 Oris™ Pro 检测，请尝试减少细胞接种的体积，以便它们更快到达板表面。如果细胞密度高，请尝试接种较少的细胞，以便所有 ce 17. 在一些孔中，细胞分布不均匀，如何才能使分布更均匀？对于 Oris™ Stopper-Based Assays，轻轻敲击板在您的工作表面上，以便在接种细胞后但在取下塞子之前均匀分布细胞。
18. 我可以在什么时候将测试化合物添加到 Oris™ 检测？对于 Oris™ 检测，添加一旦细胞贴壁且塞子已被移除，但在迁移开始之前，将测试化合物添加到培养基中。
对于 Oris™ Pro 检测，一旦 BCG 溶解且细胞已贴壁，添加测试化合物，但在迁移开始之前。
对于 Oris™ 和 Oris™ Pro 检测，粘附时间取决于细胞系和板涂层，以及附着时间。您可以在添加测试化合物之前移除和更换培养基，以消除任何非贴壁细胞。在侵袭试验中，化合物可能会掺入胶原蛋白 I 溶液中s 和/或添加到胶原蛋白上方的培养基中。
19. 在 Oris™ 检测中如何区分细胞迁移和增殖？有多种选择，最简单的优先：
运行测定的时间少于细胞倍增时间以限制增殖。添加增殖抑制剂，如丝裂霉素 C 或放线菌素 D，它们不会抑制迁移或侵袭免疫染色与抗 Ki67 抗体，一种仅在增殖细胞上发现的标记，并从结果中扣除 Ki67 阳性细胞。通过视频显微镜监测测定，以便每个细胞在测定过程中的历史记录。这是一种耗时且数据量大的方法，需要昂贵的设备。 20. 我通常使用真空吸取孔中的培养基。我可以使用 Oris™ Cell Assays 来做吗？不可以。大多数真空吸尘器功率太大，会吸走细胞和培养基。相反，使用移液管或自动液体处理设备从测定孔中去除培养基。
21. 我如何检查uantify Oris™ 或 Oris™ Pro 分析？Oris™ 和 Oris™ Pro 分析旨在与任何与行业标准微孔板格式兼容的酶标仪、显微镜或高内涵成像仪配合使用。一些应用说明详细介绍了 Oris™ 与读板器和高内涵成像仪的结合使用。下表总结了您的选择：
InstrumentOris™Oris™ Pro & Pro 384CommentsStandard Plate ReaderX需要荧光染色和 Oris™ 物理掩模。读板器应在板下方安装检测器带有虚拟掩蔽软件的读板器XX需要荧光染色。向供应商核实软件是否可以遮盖 2 毫米中央圆形检测区显微镜、倒置 XX 自动电机驱动载物台和相机，推荐用于高效分析高内涵成像仪 XX 鸭嘴兽嘴鸭嘴兽嘴可以感知很多东西，但可惜无法量化 Oris™ 分析 22。我应该如何在 Oris™ 检测中对迁移/入侵细胞进行染色？细胞通常在亮光下可见无需染色的视场光学器件，尤其是在相差光学器件可用的情况下。然而，染色使细胞更容易看到，并且可以揭示明视野光学无法揭示的生理状态。 Oris™ 和 Oris™ Pro 检测对染料的选择没有限制，如果需要，您可以同时使用多种染料。
要通过区域闭合量化迁移/侵入，我们推荐荧光细胞质染料，例如TRITC-鬼笔环肽，以便为您的检测器最大化信号。
要通过细胞计数来量化迁移/侵袭，我们建议使用核染色剂，例如 DAPI。与细胞质染色相比，将染色限制在细胞核上可创建更小的成像对象，从而在单个细胞之间提供更大的分离，从而实现更准确的计数。
您还可以考虑在接种 Oris™ 之前预先标记细胞化验。然而，一些污渍可能会影响迁移和/或入侵，可能会产生实验性人工制品。
23. I有时在装有 Oris™ 检测面罩的显微镜下会看到\"新月形效应”。这是使用酶标仪进行定量的问题吗？Oris™ 检测提供的面罩孔径为 2.1 毫米，而尺寸塞子形成的检测区的最大宽度为 2.0 毫米。较大的掩模孔径旨在允许一些荧光背景信号包含在光路中，以便将检测器置于适当的动态范围内，如本技术说明中所示。
24. 将整个带盖的 Oris™ 测定板适合我的读板器吗？有些读板器间隙有限，可能不接受带盖的板。
25. 我可以使用什么软件来量化细胞我从 Oris™ 检测中捕获的图像中的迁移/入侵？对于没有随成像系统提供的商业软件包的用户，我们建议使用 ImageJ 软件或其近亲 Fiji。两者都是免费软件。
如果您的 imaging 系统随软件包一起提供，您的供应商可以帮助您进行 Oris™ 量化，并且可能已经有专门为 Oris™ 设计的例程。有关示例，请参阅此应用说明。
26. Oris™ 和 Oris™ Pro 板的尺寸是多少？ Oris™ 板（96 孔带塞子）Oris™ Pro 板（96 孔带 BCG）Oris™ Pro 384 板（384 孔带 BCG）孔底直径6.3 mm6.58 mm3.3 mm直径孔的顶部6.45 mm6.96 mm3.7 mm无细胞检测区直径2 mm2 mm2 mmWell体积400 µL392 μL131 µL建议每孔培养基100 µL100 µL20 µL外环状区域（细胞接种区域）28.03 mm230.86 mm26.86 mm2区域中央检测区3.14 mm23.14 mm23.14 mm2板高14.85 mm14.4 mm14.4 mm带盖的板高度17.9 mm17 mm16.5 mm孔偏移（A-1位置，X）14.32 mm14.38 mm12.13 mm偏移井数（A-1 位置，Y）11.25 毫米11.24 毫米8.99 毫米井间距离9.0 毫米9.0 毫米4.5 毫米井深12.1 毫米10.9 毫米11.5 毫米井厚Bottom0.25 mm190 μm ±10%190 μm ±10%Storage4°C15 – 30°C15 – 30°C本文链接： https://www.ebiomall.com/b320-platypus/info-1585288881.html
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