SpinColumnDM50CollectionTube（2ml）50产品简介本试剂盒采用新型硅基质膜及特殊的缓冲液系统，高效专一的结合DNA，既能从琼脂糖凝胶中回收DNA片段，又能直接纯化PCR产物与酶反应物中的单链、双链DNA，可最大限度地去除引物、酶、矿物油、琼脂糖等杂质，获得高纯度的DNA，满足多种实验要求。本试剂盒可回收50bp-50kb的DNA片段，每个吸附柱最高可吸附20 g的DNA，且DNA回收效率高达90%。由本试剂盒回收纯化的DNA可直接用于酶切、连接、PCR扩增、DNA测序等各种分子生物学实验。注意事项1.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在BufferPW中加入无水乙醇。2.使用前请检查BufferPC是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。3.电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。4.切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。5.回收率与初始DNA量和洗脱体积有关。6.所有离心步骤均在室温下进行。自备试剂：无水乙醇，离心管操作步骤1．样品处理A从琼脂糖凝胶中回收DNA片段a1.将单一目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余凝胶部分），放入干净的离心管（自备）中，称取凝胶重量。注意：若胶块的体积过大，可将胶块切成碎块。a2.向胶块中加入3倍凝胶体积的BufferPC；当琼脂糖凝胶浓度 2%时，建议使用6倍凝胶体积的BufferPC（如凝胶重为100mg，其体积可视为100 l，依此类推）。a3.50℃孵育10分钟，其间不断温和地上下颠倒离心管，以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块，可再补加一些溶胶液或继续放置几分钟，直至胶块完全溶解。注意：1）在胶充分溶解后检测pH值，若pH值大于7.5，可向含有DNA的胶溶液中加10-30 l的3M醋酸钠（pH5.0）将pH值调到5-72）吸附柱的容积是700 l，若样品体积大于700 l可分批加入。3）胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在较高温度时结合DNA的能力较弱。a4.（可选步骤）当回收片段 500bp或 4kb时，应加入1倍胶体积的异丙醇，上下颠倒混匀（如凝胶为100mg，则加入100 l异丙醇）。注意：当回收片段为500bp-4kb时，加入异丙醇不会影响回收率。B从PCR反应液或酶反应液中回收DNAb1．计算PCR反应液或酶切反应液的体积，向其中加入5倍PCR反应液或酶反应液体积的BufferPC，充分混匀（无需去除石蜡油或矿物油）。例如：100 l的PCR样本中加入500 lBufferPC（不包括石蜡油或矿物油）。2．柱平衡:将吸附柱（SpinColumnDM）放入收集管（CollectionTube）中，向吸附柱中加入200 lBufferPS，12,000rpm（~13,400 g）离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。3．将从a3或b1中所得溶液加入到平衡好的吸附柱（已装入收集管）中，室温放置2分钟，12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。注意：吸附柱容积为700 l，若样品体积大于700 l可分批加入。4．向吸附柱中加入650 lBufferPW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。注意：如果纯化的DNA用于盐敏感的实验（例如平末端连接或直接测序），建议加入BufferPW静置2-5分钟再离心。5．将吸附柱放回收集管中，12,000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。6.将吸附柱放到一个新离心管（自备）中，向吸附膜中间位置加入30-50 lBufferEB（pH8.5）或水（pH7.0-8.5），室温放置2分钟。12,000rpm离心2分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。注意：1）洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围）。2）为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新滴加到吸附柱中，重复步骤6。3）洗脱体积不应小于30 l，体积过少会影响回收效率。4）如果使用TE洗脱，需要考虑其中含有的EDTA是否会影响后续的酶促反应。5）回收大于10kb的DNA片段时，BufferEB应在50℃水浴中预热，适当延长吸附和洗脱时间，可增加回收效率。上海研谨生物公司对外承接RT-PCR技术服务、细胞培养技术服务、原位杂交技术服务、免疫沉淀技术服务、WesternBlotting技术服务、动物模型构建服务、SCI论文服务、PCR实验服务，并为广大科研用户提供各种高品质的试剂和服务，如细胞、血清、Elisa试剂盒、质粒提取试剂盒、DNA产物纯化试剂盒、病毒RNA提取试剂盒、PCR等产品，针对以上各项服务，我们均有具有丰富服务经验和深厚专业背景的人员团队为您提供技术服务和支持。欢迎进入公司网站http://www.021yjsw.comQQ：847724139电话605444098邮箱yanjinbio@163.com