PEI转染手册

转染操作流程：
 
  1、细胞传代：

转染前24h内分离293T细胞至含10％胎牛血清的DMEM培养基中进行传代培养，接种密度如下：
        6孔板：0.5x106细胞
        10cm培养皿：4.0x106细胞
        15cm培养皿：9.0x106细胞

2、转染

转染前将所有试剂置于室温。

2.1质粒DNA的稀释

在无菌试管中，用无血清的DMEMW/O酚红培养基（浓度为10％）稀释质粒DNA（ug）。病毒包装体（psPAX2）：病毒包膜（pMD2G）和重组质粒DNA的稀释比例分别为4:2:1。
       

6孔板：200ul+3ug的DNA
        10cm培养皿：1ml+7-8ug的DNA
        15cm培养皿：2ml+11-12ug的DNA

  2.2转染复合体形成

将PEI（1ug/uL）加入已稀释的总DNA中，PEI与DNA（ug）的混合比率为3:1。加入后立即涡旋混合。
      

 6孔板：9ulPEI复合体（1ug/ul）=9ug
        10cm培养皿：21ulPEI复合体（1ug/ul）=21ug
        15cm培养皿：33ulPEI复合体（1ug/ul）=33ug
将添加到细胞的DNA/PEI的混合物在室温下孵育15分钟。

4、收获转染细胞

转染后48小时内收获转染细胞/或病毒上清。
 
试剂的配制：
PEI（1ug/ul）polysciences（CAT＃23966-2配制成储液：)
1、将无内毒素的无菌水加热至80℃左右溶解PEI，冷却到室温。
2、调整pH值至7.0，用0.22um的滤器过滤消毒，分装后储存在-20℃。工作液可保持在4℃

polyscience，inc，成立于1961年，起家于化学但超越化学领域的美国制造商，总部位于宾夕法尼亚州沃灵顿，公司业务主要涵盖三大块：1.实验用产品：a）成千上万种具品牌特色的化合物和试剂，应用于实验室研究，组织学，电镜和解剖病理学以及其他诊断和生命科学研究；b）种类极其宽广的单体和聚合体，满足各方研究领域；c）有机/无机化合物，生物可降解材料，磁珠，荧光素，染料和特定抗体，以及常规蛋白包被颗粒（直径范围40nm~10mm）的全球首要制造工厂；d）顶端多聚化合物的供货中心，满足各种高性能工业领域需求，包括替代能源，汽车电子，国防&航空电子，便携式通信和计算机，医疗器械组装。2.定制合成；3.cgmp生产服务。