PEI转染手册

转染操作流程：
 
  1、细胞传代：

转染前24h内分离293T细胞至含10％胎牛血清的DMEM培养基中进行传代培养，接种密度如下：
        6孔板：0.5x106细胞
        10cm培养皿：4.0x106细胞
        15cm培养皿：9.0x106细胞

2、转染

转染前将所有试剂置于室温。

2.1质粒DNA的稀释

在无菌试管中，用无血清的DMEMW/O酚红培养基（浓度为10％）稀释质粒DNA（ug）。病毒包装体（psPAX2）：病毒包膜（pMD2G）和重组质粒DNA的稀释比例分别为4:2:1。
       

6孔板：200ul+3ug的DNA
        10cm培养皿：1ml+7-8ug的DNA
        15cm培养皿：2ml+11-12ug的DNA

  2.2转染复合体形成

将PEI（1ug/uL）加入已稀释的总DNA中，PEI与DNA（ug）的混合比率为3:1。加入后立即涡旋混合。
      

 6孔板：9ulPEI复合体（1ug/ul）=9ug
        10cm培养皿：21ulPEI复合体（1ug/ul）=21ug
        15cm培养皿：33ulPEI复合体（1ug/ul）=33ug
将添加到细胞的DNA/PEI的混合物在室温下孵育15分钟。

4、收获转染细胞

转染后48小时内收获转染细胞/或病毒上清。
 
试剂的配制：
PEI（1ug/ul）polysciences（CAT＃23966-2配制成储液：)
1、将无内毒素的无菌水加热至80℃左右溶解PEI，冷却到室温。
2、调整pH值至7.0，用0.22um的滤器过滤消毒，分装后储存在-20℃。工作液可保持在4℃

polyscience，inc，成立于1961年，起家于化学但超越化学领域的美国制造商，总部位于宾夕法尼亚州沃灵顿，公司业务主要涵盖三大块：1.实验用产品：a）成千上万种具品牌特色的化合物和试剂，应用于实验室研究，组织学，电镜和解剖病理学以及其他诊断和生命科学研究；b）种类极其宽广的单体和聚合体，满足各方研究领域；c）有机/无机化合物，生物可降解材料，磁珠，荧光素，染料和特定抗体，以及常规蛋白包被颗粒（直径范围40nm~10mm）的全球首要制造工厂；d）顶端多聚化合物的供货中心，满足各种高性能工业领域需求，包括替代能源，汽车电子，国防&航空电子，便携式通信和计算机，医疗器械组装。2.定制合成；3.cgmp生产服务。

polysciences是一家化学品制造公司，产品广泛应用于各个科研领域。公司成立于1961年，起初为电子显微镜提供纳米级样本制备方案，帮助科学家揭示未知领域。随后，开拓了在病理（组织研究）应用产品，使组织除了石蜡包埋外，还能够包埋在塑料块中；开发染料和染色剂，以实现更好的样品观测方式。与政府机构合作，开发了用于诊断试剂盒应的聚合物微球。与美国国家癌症中心合作，开发天然产物分离和纯化产品，并用于紫杉醇的初步临床试验。继而开发出超顺磁珠，用于DNA、蛋白质和肽的研究。Polysciences的高纯度单体和聚合物产品在医疗器械中有许多应用，并不断开发和增强其性能。近期业务扩展到电子产品，Polysciences的精密微粒子产品拓展了纳米技术应用中测量精度。公司秉承为应用而研发，目前已拥有超过3000种产品。PolysciencesInc.致力于提供先进的技术、制造能力和技术支持，帮助客户实现他们的目标。

Polysciences, Inc. 成立于1961年，总部位于宾夕法尼亚州沃灵顿，是一家生产研发化学产品的公司。该公司的产品种类已经累计超过3000种，其产品的特点是体积小，附加值高。

Polysciences产品主要包含：

1、  单体和聚合物

2、  微球和粒子（有机、无机、可生物降解、磁珠、荧光素、染料、特异性抗体和蛋白包被颗粒，直径从40nm到10mm）用于核酸提取、蛋白分离和纯化等。

3、  高性能粘合剂、涂料和密封剂

国际上推出了一些阳离子聚合物基因转染技术，以其适用宿主范围广，操作简便，对细胞毒性小，转染效率高受到研究者们的青睐。其中树枝状聚合物（Dendrimers）和Polysciences聚乙烯亚胺（Polyethylenimine，PEI）的转染性能最佳，但树枝状聚合物的结构不易于进一步改性，且其合成工艺复杂。Polysciences聚乙烯亚胺是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔二个碳个原子，即每“第三个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”(protonsponge)体。这种聚阳离子能将各种报告基因转入各种种属细胞，其效果好于脂质聚酰胺，经进一步的改性后，其转染性能好于树枝状聚合物，而且它的细胞毒性低。大量实验证明，PEI是非常有希望的基因治疗载体。目前在设计更复杂的基因载体时，PEI经常做为核心组成成分。

转染技术新宠-Polysciences阳离子聚合物基因转染技术

其优点：适用宿主广泛，操作简便，细胞毒性小，转染率高。其中聚乙烯亚胺（PEI）的转染性能最好。聚乙烯亚胺是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔两个碳原子，就是第三个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何PH下都能充当有效的“质子海绵”体。这种聚阳离子能将各种报告基因转入各种种属细胞，其效果好于脂质聚酰胺，而且细胞毒性低。大量实验证明，PEI是非常有希望的基因治疗载体。目前在设计更复杂的基因载体时，PEI经常做为核心组成成分。

Polysciences线性聚乙烯亚胺（LinePEI）转染复合物的细胞毒性低，有利于细胞定位，而且转染率极高。

Polysciences公司的两款明星产品线性聚乙烯亚胺（23966-1和24765-1）近年来越来越多的受到研究者们的青睐。其产品被运用到大量的转染实验中，也出现在大量的文献中。

美国POLYSCIENCES公司成立于1961年，主要生产和经营LIFESCIENCES生命科学（胶体金,不含甲醛的甲醇等），病理学和显镜学微球和粒子和磁珠各种单体和聚体等产品。polysciences公司是世界上zui大zui全的多聚化合物供应商,同时是世界*的免疫学,组织化学试剂耗材供应商.