翊圣OnePot系列是针对Illumina®测序平台定向研发的酶切法DNA建库试剂盒，采用高质量片段化酶，摆脱了繁琐的超声过程，同时简化了操作流程，极大的降低了建库的时间和成本。具有优秀的文库转化率与文库扩增效率。

随着NGS技术的高速发展，人们对于效率的要求越来越高，在消耗同等的时间和精力下，人们更愿意选择快速，高效的方法。

超声打断（机械法）是NGS建库中最常用的DNA片段化方法之一（Covaris超声破碎系统），由于该方法过度依赖超声仪器和搭配的实验耗材，再加上耗时较长，被越来越多的客户所放弃。

翊圣OnePot系列酶切法DNA建库试剂盒，摆脱了繁琐的超声流程，操作简便化，针对不同样本(含FFPE)均可以获得高质量文库，是自动化平台建库的首选。

为什么选择OnePot代替机械法建库

一、精简流程

合并建库方法，优化建库流程，手工操作低于0.5h，整体文库构建仅需2h，真正的高效建库。

二、可控酶切

酶切产物片段大小只与酶切时间有关，简便可控，适用于个性化建库和自动化建库。

三、兼容FFPE高效建库

1）适用于不同程度降解的FFPE样本

对应上述样本建库详情

编号

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

InputDNA（ng）

50

50

50

50

50

50

50

50

50

10

10

cycles

8

8

8

8

8

8

8

8

8

10

10

酶切时间

（min）

6

6

6

6

6

6

6

6

6

6

10

浓度（ng/ul）

32ul洗脱

35.6

63.8

23.2

33.8

48.4

53.6

165.6

136.8

104

117.6

136

Total(μg)

1.14

2.04

0.74

1.08

1.55

1.72

5.3

4.38

3.33

3.76

4.35

2）低质量FFPE样本，搭配修复试剂建库效果更佳

四、适用范围广

适用于不同质量的痰液，腹水等微量建库样本

样本编号

642-痰液

640-痰液

666-腹水

637-腹水

642-痰液

640-痰液

666-腹水

637-腹水

浓度（ng/μl）

16.3

53.0

24.6

8.16

16.3

53.0

24.6

8.16

InputDNA

10ng

10ng

10ng

10ng

10ng

10ng

10ng

10ng

酶切时间（min）

13

10

Cycles

9

9

9

9

9

9

9

9

产量（μg）

2.58

1.32

2.44

1.39

2.21

0.91

2.26

1.21

五、精准的数据检出率

1）标准品Horizon@HD753的检出率与实际基本无差别

VariantType

ChromosomeNumber

Gene

Variant

ExpectedAllelicFrequency,%

Chr

position

ntD

102panel1:2

SNVHighGC

chr.19

GNA11

Q209L

5.6

19

3118942

A T

6.13%

SNVHighGC

chr.14

AKT1

E17K

5

14

105246551

G A

4.78%

SNVLowGC

chr.3

PIK3CA

E545K

5.6

3

178936091

G A

5.23%

LongInsertion

chr.7

EGFR

V769_D770insASV

5.6

7

Exon20insertion

GG GGCCAGCGTGG

4.54%

LongDeletion

chr.7

EGFR

ΔE746-A750

5.3

7

55242465-55242479

AGGAATTAAGAGAAGC A

3.52%

Fusion

chr.4:chr.6

ROS1

SLC34A2/ROS1fusion

5.6

4-6

fusingexon2ofSLC34A2toexon32or34ofROS1

CTGGXTCTGGAGATCTGGCTGGAGTCCCAAATAA,CTGGXTCTGGAGATCTGGATGATTTTTGGATACCA

3.58%

Fusion

chr.10

RET

CCDC6/RETfusion

5

10-10

CCDC6(EXON1)/RET(EXON12)

TGCGCAAAGCCAGCGTTACCATCGAGGATCCAAAGTGGGAATTC

5.86%

CNV

chr.7

MET

amplification

4.5copies

7

116312459-116340338

4.4

CNV

chr.2

MYC-N

amplification

9.5copies

2

16080560-16087129

期望值

实际检测值

2）FFPE DNA标准品（Horizon HD200）

捕获建库，IGT 944K cancer panel T074V1

OnePot检测到突变率的准确性与Enzymatics相当（*红色标注为更接近预期突变）

clean

all_map_reads

mapratio(%)

Targeteffectivereads

readscapturerate(%)

Dup(%)

Coverage(%)

20%Xdepthcov(%)

OnePot(withMaxUpIIamplificationmix)

17716013

17674611

99.7663018

15721075

88.94721926

31.8432

99.9895144

99.48491028

Enzymatics(withKAPAHiFiReadymix)

13805070

13775426

99.7852673

8147070

59.14205484

25.9288

99.9739449

99.68490276

Chromosome

Gene

Variant

ExpectedAllelicFrequency,%

Originalbase

Mutantbase

Frequency/OnePot,%

Frequency/Enzymatics,%

7q34

BRAF

V600E

10.70%

A

T

11.7180617

10.0371747

4q11-q12

cKIT

D816V

10.00%

A

T

9.798995

25.2446184

7p12

EGFR

ΔE746-A750

1.90%

GGAATTAAGAGAAGC

-

0.9146341

1.1053541

7p12

EGFR

L858R

2.80%

T

G

3.2357907

3.6181678

7p12

EGFR

T790M

0.90%

C

T

1.0137989

1.6100179

7p12

EGFR

G719S

24.50%

G

A

21.8106996

21.4709913

12p12.1

KRAS

G13D

15.00%

C

T

11.6261398

10.6679035

12p12.1

KRAS

G12D

6.30%

C

T

3.245283

4.0613718

1p13.2

NRAS

Q61K

12.50%

G

T

10.7090465

12.1263395

3q26.3

PI3KCA

H1047R

17.50%

A

G

14.9758454

15.7051282

3q26.3

PI3KCA

E545K

8.80%

G

A

9.798995

15.6359393

市场使用反馈

一、上海某生物公司X*

实验样本：不同质量的FFPE样本

样本数目：4（两个质量较好，两个质量较差）

实验结论：针对客户提供的2个质量较好样本（样本3/4），建库产量可远高于其预期值，对于质量较差样本（样本1/2）,使用12606（H5901150）FFPE样本修复试剂可明显改善其产量，产量均可达客户需求。建议客户针对质量较差FFPE样本使用我公司12606产品进行修复后再行建库以获得更高产量。

Chromosome

Gene

Variant

ExpectedAllelicFrequency,%

Originalbase

Mutantbase

Frequency/OnePot,%

Frequency/Enzymatics,%

7q34

BRAF

V600E

10.70%

A

T

11.7180617

10.0371747

4q11-q12

cKIT

D816V

10.00%

A

T

9.798995

25.2446184

7p12

EGFR

ΔE746-A750

1.90%

GGAATTAAGAGAAGC

-

0.9146341

1.1053541

7p12

EGFR

L858R

2.80%

T

G

3.2357907

3.6181678

7p12

EGFR

T790M

0.90%

C

T

1.0137989

1.6100179

7p12

EGFR

G719S

24.50%

G

A

21.8106996

21.4709913

12p12.1

KRAS

G13D

15.00%

C

T

11.6261398

10.6679035

12p12.1

KRAS

G12D

6.30%

C

T

3.245283

4.0613718

1p13.2

NRAS

Q61K

12.50%

G

T

10.7090465

12.1263395

3q26.3

PI3KCA

H1047R

17.50%

A

G

14.9758454

15.7051282

3q26.3

PI3KCA

E545K

8.80%

G

A

9.798995

15.6359393

二、上海某生物公司H*

实验样本：人gDNA

样本数目：1（不同Input以及不同酶切时间）

实验结论：1）Input DNA 500 ng/700 ng，PCR 5cycles，未文库产量 3μg左右 （酶切 12 min，文库主峰 300-600 bp；酶切 15min，文库主峰在 300-400 bp）

2）0.78×/ 0.2×双轮分选，文库产量 1 μg左右 （主峰 300 bp，文库范围 250-450 bp），可满足客户实验需求。

实验参数

1

2

3

4

InputDNA

500ng

500ng

700ng

700ng

酶切时间

12min

15min

12min

15min

Cycles

5

5

5

5

文库产量(μg)

3.06

3.06

2.98

3.36

3.12

2.91

3

3

分选后产量(μg)

0.88

0.9

0.99

0.96

0.97

1.1

1.00

1.11

订购详情：

建库试剂盒

产品编号

规格

Hieff NGS®MaxUpⅡ Dual-mode mRNA Library Prep Kit for Illumina®

12300ES24/96

24/96 T

HieffNGS®Ultima DNA Library Prep Kit for Illumina®

12199ES24/96

24/96 T

HieffNGS®MaxUpⅡ DNA Library Prep Kit for Illumina®

12200ES24/96

24/96 T

HieffNGS®OnePotDNA Library Prep Kit for Illumina®

12203ES24/96

24/96 T

HieffNGS®OnePotⅡ DNA Library Prep Kit for Illumina®

12204ES24/96

24/96 T

HieffNGS®Fast Tagment DNA Library Prep Kit for Illumina®

12206ES24/96

24/96 T

文库构建磁珠

产品编号

规格

Hieff NGS®cfDNA Clean Beads（100~200 bp）

12599ES08/56

5/60 mL

Hieff NGS®Smarter DNA Clean beads (50 bp以上）

12600ES08/56

5/60 mL

Hieff NGS®DNA Selection Beads（Superior AMPure XP alternative）

12601ES08/56

5/60 mL

Hieff NGS®RNA Cleaner

12602ES08/56

5/60 mL

Hieff NGS®mRNA Isolation Master Kit

12603ES24/96

24/96 T

建库接头

产品编号

规格

Hieff NGS®96 Single Index Primer Kit for Illumina®, Set 1/2

12611/12612ES02

48×2 T

Hieff NGS®384 Dual Index Primer Kit for Illumina®, Set 1/2

12613/12614ES02

96×2 T

Hieff NGS®Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 1/2

12615/12616ES04/16

12×4/12×16 T

Hieff NGS®Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 3/4

12617/12618ES04/16

12×4/12×16 T

Hieff NGS®Tagment Index Kit for Illumina®,(96 Index)

12610ES96

96 T

建库模块

产品编号

规格

Hieff NGS®Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent

12609ES50

50 T

Hieff NGS®Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module

12608ES24/96

24/96 T

2×Ultima Amplification Mix

12620ES24/96

24/96 T

2×Super Canace®ⅡHigh-Fidelity Mix for Library Amplification

12621ES03/08

24/96 T

Hieff NGS®Dual-Mode cDNA Synthesis Kit

12250ES24/96

24/96 T

文库定量

产品编号

规格

HieffNGS®Library Quantification Kit for Illumina®, qPCR Master Mix

12302ES05

500 T

HieffNGS®Library Quantification Kit for Illumina®, DNA Standard (1-6)

12307ES09

6×96 μL

dsDNA HS Assay Kit for Qubit®

12640ES60/76

100/500 T

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