货号：L6030-HC-L

产品描述：

T4 DNA连接酶催化双链DNA或RNA的末端5 磷酸和3 羟基之间形成磷酸二酯键。该酶有效连接钝端和粘端，并修复双链DNA，RNA或DNA / RNA杂合体中的单链缺口（1）。

规格：

600,000 U/ml

浓度：

240,000 U

保存：

-25 C至-15 C

纯度（SDS-PAGE）

99％

活性：

300,000 U/mg

SS核酸外切酶

6,000 U 1.0 % Released

DS核酸外切酶

6,000 U 1.0 % Released

DS内切核酸酶

6,000 U=No Conversion

大肠杆菌DNA污染

6,000 U 10 copies

蛋白质来源

携带克隆的T4 DNA连接酶基因的重组大肠杆菌菌株。

提供：

10 mM Tris-HCl50 mM KCl1 mM DTT0.1 mM EDTA50% glycerolpH 7.5 @ 25 C

随附：

B1010 (2X Rapid Ligation Buffer)B6030 (10X T4 DNA Ligase Buffer)

2X Rapid Ligation Buffer (B1010):132mM Tris-HCI20 mM MgCl22 mM DTT2 mM ATP15% PEG 6000pH 7.6 @ 25 C

10X T4 DNA Ligase Buffer (B6030):500mM Tris-HCI100 mM MgCl250 mM DTT10 mM ATPpH 7.6 @ 25 C

单位定义1单位定义为在23℃孵育30分钟后，在50 l1X DNA连接酶缓冲液中加入100ng具有粘性末端的DNA片段的50％所需的DNA连接酶的量。

使用说明：

1、反应设置

Amount

Description

Final Concentration

10 uL

2X Rapid Ligation Buffer

1X

X uL

Vector

1-10 ng/uL

X uL

Insert

1-10 ng/uL

1 uL

T4 DNA Ligase (600 U/ uL)

30 U/uL

X uL

Type I Water

N/A

20 uL

Total Volume

2、过程操作

1）将所有上述组分加入干净的反应容器中，通过移液充分混合。

2）25 C孵育10分钟。

3）使用PCR清洁柱立即纯化DNA并洗脱约50 L。

4）- 或 - 在TE或水中立即稀释（至少1:10，但足以使0.1-10ng连接产物转化）

5）将0.1-10ng连接产物转化为与载体相容的化学或电子感受态细胞系

3、其他

在1X T4 DNA连接酶反应缓冲液中用Lambda-Hind III DNA片段底物测量，一个酶酶T4 DNA连接酶粘性末端单位相当于约3个粘性末端单位。

一个Weiss单位大约相当于22个Enzymatics粘性末端单位。

T4 DNA连接酶是ATP依赖性的。建议在-20 C储存一年后丢弃反应缓冲液，并用新鲜缓冲液代替以确保zui佳性能。当靶向插入片段：载体比率在2和6之间时，单插入连接是zui佳的。高于6：1的比率将促进插入多个片段，而降至2：1以下将降低连接效率。

对于有问题的连接或DNA浓度未知的情况，可能需要改变比率并进行多次连接。

高浓度PEG的存在将显着降低电感受态细胞的转化效率。为了zui大限度地转化为电感受态细胞，建议采用以下方法：

zui佳：连接后，使用DNA纯化离心柱纯化产物并在50 LTE中洗脱。DNA现在已准备好转化。要转化的DNA的zui终数量应该在0.1-10ng范围内。

更好：在ddH2O或TE中稀释连接产物以降低PEG浓度。要转化的DNA的zui终数量应该在0.1-10ng范围内。

Enzymatics的高浓度T4 DNA连接酶与2X快速连接缓冲液结合使用，极大地刺激了平端连接的速度和效率，因此不建议长时间孵育（ 10分钟），并可能大大降低连接产物的转化效率。为了使正确的插入/载体组合的转化效率zui大化，推荐使用以下方案。

酶学10X T4 DNA连接酶缓冲液不含PEG，并且与标准连接方案相兼容，该方案不规定使用快速/快速/快速格式缓冲液。

部分产品信息：

货号

品名

规格

浓度

品牌

N2070-10-L

ATP Solution

50 mol

10 mM

Enzymatics

N2050-10-L

10 mM dNTP Solution Mix

100 mol

10 mM

Enzymatics

N2010L

100 mM 75 mol dNTP Solution Set

75 mol

100 mM

Enzymatics

N2010-A-L

100 mM dATP Solution

75 mol

100 mM

Enzymatics

N2050L

100 mol dNTP Solution Mix

100 mol

25 mM

Enzymatics

Y9180L

10x Uracil Cleavage System

750 Reactions

N/A

Enzymatics

P7670

2x HiFi PCR Master Mix

1 rxn

2x

Enzymatics

Y9420L

5x ER/A-Tailing Enzyme Mix

24 reactions

N/A

Enzymatics

Y9380L

E. coli Pyrophosphatase

50 U

100 U/mL

Enzymatics

Y9030L

E. coli Single-Stranded DNA Binding Protein

1.5 mg

2.75 mg/ml

Enzymatics

Y9140-HC-L

End-Repair Mix (High Concentration)

75 Reactions

1 Rxn/ L

Enzymatics

Y9140-LC-L

End-Repair Mix (Low Concentration)

200 Reactions

1 Rxn/ L

Enzymatics

Y9080L

Endonuclease VIII

10,000 U

10,000 U/ml

Enzymatics

P7600L

EnzScript (MMLV Reverse Transcriptase RNase H-)

10,000 U

200,000 U/mL

Enzymatics

X8010L

Exonuclease I

30,000 U

20,000 U/ml

Enzymatics

X8020L

Exonuclease III

50,000 U

100,000 U/ml

Enzymatics

P7010-HC-L

Klenow (3 5 exo-) (High Concentration)

10,000 U

50,000 U/ml

Enzymatics

P7010-LC-L

Klenow (3 5 exo-) (Low Concentration)

10,000 U

5,000 U/ml

Enzymatics

P7060L

Klenow Fragment

2,500 U

5,000 U/ml

Enzymatics

X8030L

Lambda Exonuclease

10,000 U

5,000 U/ml

Enzymatics

P7040L

M-MuLV Reverse Transcriptase

100,000 U

200,000 U/ml

Enzymatics

P7090L

Mako DNA Polymerase (3 5 exo-)

3,000 U

30,000 U/ml

Enzymatics

P7140-HC-L

Manta 1.0 DNA Polymerase (High Concentration)

100,000 U

400,000 U/ml

Enzymatics

P7140-LC-L

Manta 1.0 DNA Polymerase (Low Concentration)

100,000 U

40,000 U/ml

Enzymatics

P7610L

NGS Library Prep: 2X VeraSeq PCR Mix 250 Reactions

250 Reactions

2X

Enzymatics

P7590L

Phoenix Hot Start Taq DNA Polymerase

500 U

5,000 U/ml

Enzymatics

P7460L

Poly(A) Polymerase

1,000 U

5,000 U/mL

Enzymatics

Y9260L

RecA

1.5 mg

2.0 mg/mL

Enzymatics

Y9220L

RNAse H

5,000 U

5,000 U/ml

Enzymatics

Y9240L

RNAse Inhibitor

20,000 U

40,000 U/ml

Enzymatics

L6010L

T3 DNA Ligase

900,000 U

3,000,000 U/ml

Enzymatics

L6030-LC-L

T4 DNA Ligase

150,000 U

120,000 U/ml

Enzymatics

L6030-HC-L

T4 DNA Ligase (Rapid)

240,000 U

600,000 U/ml

Enzymatics

P7080L

T4 DNA Polymerase

2,000 U

3,000 U/ml

Enzymatics

Y9130L

T4 Gene 32 Protein

1.0 mg

10 mg/mL

Enzymatics

Y9040L

T4 Polynucleotide Kinase

10,000 U

10,000 U/ml

Enzymatics

L6050L

T4 RNA Ligase 1

10,000 U

20,000 U/ml

Enzymatics

L6080L

T4 RNA Ligase 2

4,500 U

30,000 U/ml

Enzymatics

L6070L

T4 RNA Ligase 2 Truncated

500 U

5,000 U/ml

Enzymatics

L6020L

T7 DNA Ligase

900,000 U

3,000,000 U/ml

Enzymatics

P7260L

T7 DNA Polymerase

3,500 U

10,000 U/ml

Enzymatics

P7180L

T7 RNA Polymerase

50,000 U

50,000 U/ml

Enzymatics

L6060L

Taq DNA Ligase

20,000 U

40,000 U/ml

Enzymatics

P7110L

Taq DSC 2.0 DNA Polymerase

1,250 U

5,000 U/ml

Enzymatics

P7250L

Taq-B DNA Polymerase

10,000 U

5,000 U/ml

Enzymatics

P7620L

TaqIT

5,000 U

50,000 U/mL

Enzymatics

P7070L

Terminal deoxynucleotidyl Transferase (TdT)

6,000 U

20,000 U/ml

Enzymatics

G5020L

Thermolabile UDG

500 U

1,000 U/ml

Enzymatics

Y9370L

Thermostable Pyrophosphatase

1,250 U

2,000 U/ml

Enzymatics

G5010L

Uracil DNA Glycosylase

10,000 U

2,000 U/ml

Enzymatics

P7511L

VeraSeq 2.0 High-Fidelity DNA Polymerase

500 U

2,000 U/ml

Enzymatics

P7520L

VeraSeq ULtra DNA Polymerase

500 U

2,000 U/ml

Enzymatics

L6030-W-L

WGS Ligase

24 Reactions

N/A

Enzymatics

P7640L

ZipScript One-Step RT-qPCR Kit

1000 Reactions

N/A

Enzymatics

P7020-HC-L

29 DNA Polymerase (High Concentration)

2,000 U

100,000 U/ml

Enzymatics

P7020-LC-L

29 DNA Polymerase (Low Concentration)

2,000 U

10,000 U/ml

Enzymatics

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